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高IgE症候群モデルマウスの作製とその検討

高IgE综合征模型小鼠的建立及研究

基本信息

批准号：
21659253
负责人：
峯岸克行
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659253/
关键词：
原発性免疫不全症高IgE症候群モデルマウスノックインマウス

项目摘要

原発性免疫不全症は免疫系遺伝子の先天異常により発症する疾患で、ヒトの免疫系遺伝子の生体内機能の解明に大きな貢献をしてきた。高IgE症候群はその1つで黄色ブドウ球菌による皮膚・肺の感染症、アトピー性皮膚炎、血清IgEの高値を呈する。今回我々がその原因遺伝子を世界に先駆けて発見した高IgE症候群において、STAT3変異の病態形成機構を明らかにするために、STAT3のドミナントネガティブ変異体を発現するコンディショナルノックインマウスを作成した。STAT3の機能異常はLIFのシグナル伝達を障害して相同組換えをしたES細胞の生存・増殖に悪影響を及ぼす可能性があるため、野生型STAT3のcDNAをネオマイシン耐性遺伝子と共にloxP配列ではさみ、その下流にΔV463のSTAT3-DN変異を配置した。サザンブロッティングでhomologous recombinationしたクローンを選択し、8細胞凝集法でキメラマウスを作製し、高キメリズムのものを選択しC57BL/6マウスと交配、germline transmissionを確認した。このマウスと卵細胞特異的にCreを発現したマウス(ZP3-Creマウス)の雌とを交配し、全身にSTAT3-DNを発現するマウスを作製した。これまでの実験結果で、STAT3-DNを片アレルに発現するマウスでは血清IgEレベルが100倍以上に上昇し、IL-17の産生も低下することが明らかになった。また、ネオマイシン耐性遺伝子はPCR法によっても検出されないため、100%の効率でCreによるloxPサイトの組換えは起こったものと考えられた。さらに、RT-PCR法でこのマウスのSTAT3遺伝子を増幅し、塩基配列を検討したところ正常のアレルが50%、ΔV463のアレルが50%発現していることが確認され、目的としたマウスの作製に成功したことが明らかになった。

Primary immunodeficiency is a disease that causes congenital abnormalities in the immune system and contributes significantly to the understanding of the biological functions of the immune system. HyperIgE syndrome includes 1 case of yellow fever, skin and lung infections, dermatitis, and high serum IgE levels. In this paper, the causes of high IgE syndrome in the world were first discovered, and the mechanism of formation of STAT3 was clearly identified. STAT3 dysfunctions include: LIF gene expression, liF gene expression, liF gene expression C57BL/6 Homological recombination, germline transmission, and cell agglutination Ovum specific Cre development and female mating The results showed that STAT3-DN levels increased by more than 100 times and IL-17 levels decreased. The PCR method was used to detect the gene expression of Cre lox protein and to detect the gene expression of Cre lox protein in 100%. In addition, RT-PCR method can increase the amplitude of STAT3 gene, increase the base alignment, reduce the normal rate to 50%, and reduce the rate of ΔV463 to 50%.