Structure-activity relationship and thermostability of ribonucleoprotein enzyme

核糖核蛋白酶的构效关系及热稳定性

• 批准号: 22380062
• 负责人: KIMURA Makoto
• 金额: $ 11.65万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2012
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22380062/
• 关键词: 酵素利用学; リボザイム; リボ核タンパク質複合体酵素; tRNA; 超好熱性アーキア; 超好熱古細菌; X線小角散乱; X線結晶構造解析; リボ核タンパク質

The ribonuclease P (RNase P) in the hyperthermophilic archaeon Pyrococcus horikoshiicomprises RNA (PhopRNA) and five proteins. We analyzed the RNA binding mode of the proteins, using a pair of complementary fluorescence-labeled oligoribonucleotides. Fluorescence resonance energy transfer (FRET)-based assayssuggests that the RNase P proteins assist PhopRNA in attaining a functionally active conformation via a distinct mode of binding. Moreover, Thermodynamic analysis revealed that PhoRpp38 and PhopRNA interact with each other with an association constant (Ka) of 1.56 x 107M-1. It was further found that PhoRpp38 simultaneously binds two stem-loop structures in PhopRNA approximately with an equal affinity. On the basis of the results, it was suggested that the simultaneous binding of PhoRpp38 to SL1 and SL2 makes an appropriate orientation of the S and C domains and that PhoRpp38 binding stabilizes base pairing, which increases base staking in PhopRNA

嗜热古细菌中的核糖核酸酶P(RNaseP)包括RNA(PhopRNA)和五种蛋白质。我们利用一对互补的荧光标记寡核苷酸分析了蛋白质的RNA结合模式。基于荧光共振能量转移(FRET)的分析表明，RNaseP蛋白通过一种不同的结合模式帮助PhopRNA获得功能活性构象。热力学分析表明，PhoRpp38与PhopRNA相互作用，缔合常数Ka为1.56×107M-1。进一步发现，PhoRpp38以大约相等的亲和力同时结合PhopRNA中的两个茎环结构。在这些结果的基础上，认为PhoRpp38与SL1和SL2的同时结合使S和C结构域有适当的取向，并且PhoRpp38结合稳定了碱基配对，从而增加了PhopRNA中的碱基对

项目成果

Thermodynamic analysis of a multifunctional RNA-binding protein PhoRpp38 in the hyperthermophilic archaeon Pyrococcus horikoshiiOT3

超嗜热古菌 Pyrococcus horikoshiiOT3 中多功能 RNA 结合蛋白 PhoRpp38 的热力学分析

• 发表时间: 2012
• 期刊: Biosci. Biotechnol. Biochem.
• 作者: K. Oshima;T. Nakashima;Y. Kakuta;K. Tsumoto;and M. Kimura
• 通讯作者: and M. Kimura

RNase P 構成タンパク質 Rpp38と RNA の相互作用様式と複合体の結晶化

RNase P组分蛋白Rpp38与RNA的相互作用方式及复合物结晶

• 发表时间: 2012
• 作者: 大嶋浩介;中島崇;濱崎真人;角田佳充;木村誠
• 通讯作者: 木村誠

アーキアリボヌクレアーゼPの触媒活性の構造基盤

古菌核酸酶 P 催化活性的结构基础

• 发表时间: 2011
• 作者: Nagata;Y.;et al;木村誠
• 通讯作者: 木村誠

Arabidopsis thaliana 由来リボヌクレアーゼ P-様タンパク質・PRORP1 の酵素化学的性質と結晶化

拟南芥核糖核酸酶 P 样蛋白 PRORP1 的酶化学性质和结晶

• 发表时间: 2012
• 作者: 今井崇喜;中山郁;前田卓;角田佳充;木村誠
• 通讯作者: 木村誠

超好熱古細菌RNase P RNAの高次構造モデリング

超嗜热古菌 RNase P RNA 的高阶结构模型

• 发表时间: 2011
• 作者: 中尾祐士;中島崇;山口浩輝;角田佳充;郷田秀一郎;木村誠
• 通讯作者: 木村誠