Rekonstitution, funktionelle Analyse und Regulation von Mureinsynthese Multienzymkomplexen aus Escherichia coli

大肠杆菌胞壁蛋白合成多酶复合物的重建、功能分析和调控

• 批准号: 5397441
• 负责人: Professor Dr. Waldemar Vollmer
• 金额: --
• 依托单位: Institute for Cell and Molecular Biosciences (aufgelöst)
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Units
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2003-12-31 至 2007-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5397441?language=en
• 关键词: Rekonstitution; funktionelle; Analyse; und; Regulation

Im Rahmen des Vorhabens sollen Multienzymkomplexe aus den gereinigten Proteinen rekonstituiert und funktionell charakterisiert werden, die an der Synthese des bakteriellen Exoskeletts, dem Mureinsacculus, beteiligt sind. Der Mureinsacculus ist ein einziges Makromolekül, gebildet aus Zuckerketten, die durch kurze Peptide quervernetzt sind. Der Sacculus umschliesst die Zelle vollständig und stabilisiert die cytoplasmatische Membran. Während des Wachstums der Zelle wird der Mureinsacculus vergrössert und während der Zellteilung in zwei Tochtersacuculi geteilt. Dabei wird nicht nur neues Murein synthetisiert und in den bestehenden Sacculus eingebaut, sondern auch altes Murein aus dem Sacculus herausgeschnitten (Murein-Turnover). Hierfür ist ein reguliertes Zusammenspiel zwischen synthetischen und hydrolytischen Enzymen notwendig. Tatsächlich konnten in vorhergehenden Untersuchungen direkte Protein-Protein-Interaktionen zwischen bestimmten Mureinsynthasen und -hydrolasen aus Escherichia coli charakterisiert werden, die in vivo Murein synthetisierende Multienzymkomplexe ausbilden könnten. Diese Komplexe sollen in vitro in möglichst nativer Form aus den Einzelkomponenten rekonstituiert werden. Mit Hilfe eines funktionellen Mureinsynthesetests sollen die Bedingungen für die Ausbildung der Komplexe gefunden werden und mögliche weitere, bislang unbekannte Komponenten (Strukturproteine, Kofaktoren) identifiziert werden. Die Struktur von in vitro synthetisiertem Murein soll analysiert und mit dem in vivo gebildeten verglichen werden. Parallel dazu sollen in einem globalen Ansatz periplasmatische Proteine und Membranproteine identifiziert werden, die an Murein binden und dadurch eine regulierende Funktion auf die Mureinsynthese bzw. -hydrolyse haben könnten. Die Funktionen der identifizierten Murein-bindenden Protein sollen u.a. im in vitro Mureinsynthesetest untersucht werden.

在由具有代表性和功能性韦尔登组成的前体多酶复合物中，在Mureinsacculus中合成的Bakteriellen Exoenzymes中，发现了这一点。Mureinsacculus是一种由Zuckerketten产生的小分子物质，它是通过肽来产生的。小囊使细胞质膜变得更强更稳定。Während des Wachstums der Zelle wird der Mureinsacculus vergrössert and während der Zellteilung in zwei Tochtersacuculi geteilt.大悲不仅是新的胞质合成物，而且是在一个最好的球囊中合成的，因此也有来自球囊的胞质（胞质翻转）。Hierfür is ein reguliertes Zusammenspiel zwischen synthetischen and hydrolytischen Enzymen notwendig. Tatsächlich konnten in vorhergehenden Untersuchungen direkte Protein-Protein-Interaktionen zwischen bestimmten Murein purification asen und -hydrolasen from Escherichia coli charakterisiert韦尔登，die in vivo Murein synthetisierende Multienzymkomplexe ausbilden könnten. Diese Complexe sollen in vitro in möglichst nativer Form aus den Einzelkomponenten rekonstituiert韦尔登. Mit Hilfe的一项功能性Murein合成试验解决了韦尔登和其他分子复合物的生物学基础问题，但无法识别韦尔登（Strukturproteine，Kofaktoren）。体外合成的细胞壁结构易于分析，并可在体内形成完整的韦尔登。在全球范围内，我们同时解决了抗肿瘤细胞周质蛋白和膜蛋白的鉴定问题，并在此基础上建立了一种与肿瘤细胞结合和调节肿瘤细胞合成功能的方法。-hydrolyse haben könnten. Die Funktionen der identifizierten Murein-bindenden Protein sollen u.a.在体外Murein合成试验中进行韦尔登。