細胞内型ホスホリパーゼ(iPLA1)欠損による不妊発症機構の細胞生物学的解析

细胞生物学分析细胞内磷脂酶（iPLA1）缺陷引起不孕症的机制

• 批准号: 22790087
• 负责人: 有光 なぎさ
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Tokyo University of Pharmacy and Life Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22790087/
• 关键词: 欠損マウス; 精子形成; 不妊; ホスホリパーゼ

グリセロリン脂質のsn-1位のエステル結合の加水分解(phospholipase A1活性:PLA1活性)を触媒するiPLA1ファミリー(iPLA1α、β及びγ)の精巣での機能を解明するために3種の遺伝子欠損マウスの作製を行った。現時点ではジャームライントランスミッターが得られたばかりのiPLA1αを除き、iPLA1β及びiPLA1γ欠損マウスの解析を行っている。iPLA1βおよびγ遺伝子欠損マウスは生存可能(1年齢まで解析)であった。精巣での機能解析のための交配実験の結果β欠損オスマウス(6週～24週令)は不妊傾向にあることを見出した。また、受精過程における異常であるか否かについて、欠損オス精子を用いて体外受精実験を行い、その受精率を調べた所、受精後第2極体の放出及び2細胞への卵割を示す割合が少なかった。γ欠損オスマウスでの交配でも産仔数が少ない傾向にあったがβ欠損マウスほど顕著ではなかった。精細胞分化過程での異常の有無を見るため、ヘマトキシリン、エオジン染色を行い、その構造に野生型と差があるかを解析した結果、体外受精率が著しく低いβ欠損マウス精巣において伸長型精子まで分化していなかった。また、精巣上体尾部から採取した精子のPNA染色にてアクロソーム形成を見るとβ欠損マウスはアクロソーム形成不全がおきていた。γ欠損マウスは野生型と組織学的な差がほとんど見られなかった。精細胞でのiPLA1βの発現は核近傍及び核を取り囲むように局在がみられる。核近傍の領域はこれまでの知見より、ゴルジ体から小胞を介してアクロソームの合成が行われている。さらに、iPLA1βが小胞輸送に関わる因子と結合することや、培養細胞内だが、細胞内タンパク質輸送に関わることが示唆されていることから、精子形成過程において重要なタンパク質の細胞内局在に関わるのではないかと考えている。

グ リ セ ロ リ ン lipid の sn - 1 の エ ス テ ル combining の hydrolytic decomposition (phospholipase A1 activity: PLA1 active) を catalyst す る iPLA1 フ ァ ミ リ ー (iPLA1 alpha, beta and び gamma) の fine 巣 で の function を interpret す る た め に three の heritage 伝 son owe loss マ ウ ス の cropping を line っ た. Now point で は ジ ャ ー ム ラ イ ン ト ラ ン ス ミ ッ タ ー が must ら れ た ば か り の iPLA1 alpha を except き, iPLA1 beta and び iPLA1 gamma owe loss マ ウ ス の parsing line を っ て い る. The iPLA1βおよびγ remnant 伝 is underdamaged and ウス ウス survival possibility (1 year 齢まで analysis)であった. Fine 巣 で の function analytical の た め の mating be 験 の results beta owes loss オ ス マ ウ ス (6 ~ 24 weeks) は not perfect tendency に あ る こ と を shows し た. ま た, fertilization に お け る abnormal で あ る か no か に つ い て, owe damage オ ス sperm を with い て in vitro fertilization (ivf) be 験 を い, そ の fertilization rate を adjustable べ た, after fertilization by second polar body の release and び 2 cells へ の egg cut を shown less す cut close が な か っ た. Gamma owe loss オ ス マ ウ ス で の mating で も litter size less が な い tendency に あ っ た が beta owes loss マ ウ ス ほ ど 顕 the で は な か っ た. Abnormal sperm cells differentiation で の の see whether を る た め, ヘ マ ト キ シ リ ン, エ オ ジ ン dyeing line を い, そ の tectonic に wild-type と poor が あ る か を parsing し た results, in vitro fertilization rate が the し く low い beta owes loss マ ウ ス fine 巣 に お い て elongation type sperm ま で differentiation し て い な か っ た. ま た and fine 巣 upper tail か ら take し た sperm の PNA staining に て ア ク ロ ソ ー ム form を see る と beta owes loss マ ウ ス は ア ク ロ ソ ー ム form is not complete が お き て い た. The な poor がほとん な of the wild-type と histology of γ is found in られな った った った. Spermatocytes で <s:1> iPLA1β gites are found near the で nucleus and in the び nucleus を. Youdaoplaceholder3 is located in がみられる. Nuclear nearly alongside の field は こ れ ま で の knowledge よ り, ゴ ル ジ body か ら vesicular を interface し て ア ク ロ ソ ー ム の synthetic line が わ れ て い る. さ ら に, iPLA1 beta が vesicular transport に masato わ る factor と combining す る こ と や, cultivating cells だ が, intracellular タ ン パ ク mass transport に masato わ る こ と が in stopping さ れ て い る こ と か ら, sperm formation に お い て important な タ ン パ ク qualitative の cells inside bureau in に masato わ る の で は な い か と exam え て い る.