一回の投与で繰り返しタンパク質を供給可能なオンデマンド型遺伝子治療システムの開発

开发可通过单次给药重复提供蛋白质的按需基因治疗系统

• 批准号: 22659009
• 负责人: 高倉 喜信
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22659009/
• 关键词: 遺伝子発現; 肝臓; 転写因子; 非ウィルスベクター; 物理刺激

治療タンパク質を"必要に応じて繰り返し"発現させる「オンデマンド型遺伝子治療システム」の実現を目的に、遺伝子発現再活性化のためのシグナルの探索を行った。大容量の等張溶液を急速に静脈内投与するハイドロダイナミクス法(HD法)により一過性発現型plasmid DNA (pDNA)を用いて遺伝子導入したのち、等張溶液をHD法に準じて投与することで、低下した発現が再上昇する遺伝子発現再活性化現象がみられること、この再活性化現象には転写因子AP-1やNF-κBの活性化が関与することを既に報告している。これらの転写因子を活性化する代表的な要因として炎症性サイトカインと活性酸素が挙げられることから、再活性化に及ぼす炎症性サイトカイン及び活性酸素の影響について検討した。HD法によって炎症性サイトカインであるインターロイキン6(IL6)が産生されることを見出したが、その産生細胞であるマクロファージを除去した場合にもHD法による再活性化現象は認められた。また、リポポリサッカライドを投与することでIL6の産生を増大させた場合には再活性化は起こらず、IL6の関与はほぼ否定された。一方、活性酸素を消去するカタラーゼあるいはN-アセチルシステインの投与によりHD法による再活性化は抑制され、その一方で、四塩化炭素の投与により活性酸素を発生させることで再活性化が認められた。従って、活性酸素レベルの制御が、オンデマンド型遺伝子治療システムの実現には有望であることを示した。

为了实现“按需基因治疗系统”，在该系统中，根据需要重复表达治疗蛋白，搜索了基因表达重新激活的信号。已经报道说，基因转移是使用瞬时表达的质粒DNA（PDNA）使用流体动力学（HD）进行的，其中大量的大量溶液迅速静脉内静脉内迅速实施，然后根据基因表达反应现象的HD溶液进行静脉溶液，并根据其反应的现象进行了反应，并以此为激进的表达，并以此为激进。因子AP-1和NF-κB。由于促炎性细胞因子和活性氧是激活这些转录因子的典型因素，因此检查了炎症细胞因子和活性氧对重新激活的影响。已经发现，HD方法会产生炎症性细胞因子白介素6（IL6），但是当产生产生的巨噬细胞被去除时，HD方法还显示出一种重新激活现象。此外，当脂多糖给药增加了IL6的产生时，未进行重新激活，并且几乎拒绝IL6的参与。另一方面，施用过氧化氢酶或N-乙酰半胱氨酸消除了通过HD方法抑制活化的活性氧，而施用四氯化碳则通过产生活性氧表现出重新激活。因此，这表明，控制活性氧水平有望实现按需基因治疗系统。

项目成果

Positive correlation between the generation of reactive oxygen species and activation/reactivation of transgene expression after hydrodynamic injections into mice.

水动力注射小鼠后，活性氧的产生与转基因表达的激活/重新激活之间呈正相关。

• 发表时间: 2011
• 期刊: Pharmaceutical Research
• 影响因子: 3.7
• 作者: Takiguchi N.;Takahashi Y.;Nishikawa M.;Matsui Y.;Fukuhara Y.;Oushiki D.;Kiyose K.;Hanaoka K.;Nagano T.;Takakura Y.
• 通讯作者: Takakura Y.