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RNAiによる遺伝子ノックダウンと抗原デリバリーを組み合せた新規免疫療法の確立

建立一种新的免疫疗法，结合基因敲除和使用 RNAi 的抗原递送

基本信息

批准号：
17659045
负责人：
高倉喜信
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

RNA干渉(RNA interference:RNAi)は効率よく特定遺伝子の"ノックダウン"が可能な手法であり、既に有用な遺伝子機能解析ツールとして広範な基礎研究の領域で汎用されている。一方、RNAiの治療への応用も強く期待されており、培養細胞を用いたin vitroの系を中心に研究が展開されている。本研究では、最も強力な抗原提示細胞である樹状細胞を標的に取り上げ、この細胞に発現している補助刺激分子をRNAiによりノックダウンさせると同時に樹状細胞へのターゲティング能を賦与した抗原タンパクをデリバリーすることを試みた。これにより、十分な補助刺激シグナルがない状態でT細胞への抗原提示が起こる人工的"アネルギー"を作製することにより抗原特異的な免疫寛容の誘導を試み、新たな免疫療法としての可能性を検討する。補助刺激分子CD80およびCD86を標的分子として選択し、mRNAの配列を考慮したshRNA(short hairpin RNA)発現プラスミドベクターを構築した。これらをマウス樹状細胞株DC2.4細胞にトランスフェクションし、卵白アルブミン反応性のT細胞ハイブリドーマを用いてIL-2産生を指標にT細胞活性化能を評価した。その結果、コントロールベクターをトランスフェクションした細胞に比較し、shRNA発現ベクターを導入した細胞ではIL-2産生の減少が見られ、補助刺激分子ノックダウンによりT細胞活性化能を減弱できる可能性が示された。しかしながら、抗原提示細胞においてはshRNA発現ベクターの導入効率が低く、その改善が重要課題であることも明らかとなった。

RNA interference (RNAi) is widely used in the field of basic research in order to improve the efficiency of specific genes and to analyze the function of useful genes. The research of RNAi therapy in vitro was carried out in the center of cell culture. In this study, the most potent antigen prompt cells were selected from dendritic cells, and these cells were found to be able to confer RNAi and antigen on dendritic cells. This is the first time that a patient has been diagnosed with an immune disorder. The target molecules of CD80 and CD86 were selected and mRNA alignment was considered, and shRNA(short hairpin RNA) was constructed. The dendritic cell line DC2.4 was evaluated for T cell activation using IL-2 production as an indicator of T cell activity. The results showed that shRNA expression in cells transfected with IL-2 decreased, and the possibility of decreased activation of T cells by supplemental stimulatory molecules was demonstrated. The efficiency of shRNA delivery is low and improvement is an important issue.