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遺伝子発現再活性化現象を利用したリピータブルタンパク質発現システムの開発

利用基因表达重新激活现象开发可重复的蛋白质表达系统

基本信息

批准号：
21659007
负责人：
高倉喜信
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659007/
关键词：
遺伝子発現肝臓転写因子非ウイルスベクター物理刺激

项目摘要

治療タンパク質を"必要に応じて繰り返し"発現させる「オンデマンド型遺伝子治療システム」の実現を目的に、遺伝子発現再活性化のためのシグナル探索ならびに機構解明を試みた。まず、肝臓で速やかに不活化されるCMVプロモータを含むプラスミドを採用し、肝臓に種々の刺激を加えたときの遺伝子発現変動を解析することで、遺伝子発現を再活性化する刺激の探索を行った。その結果、大容量の等張溶液を血管内に急速に投与するハイドロダイナミクス(HD)法に準じた投与に加えて、肝臓の圧迫、電気パルスなど、肝臓への遺伝子導入方法として有用であることが報告されている方法が、遺伝子発現を再活性化しうることを見出した。以前の検討において、HD法による再活性化には、肝臓でのNF-kappaBやAP-1の活性化が関与することが示されていたことから、これら転写因子を活性化することが知られる肝臓虚血・再灌流(I/R)の遺伝子発現再活性化に及ぼす影響について検討したところ、このI/Rによっても肝臓での遺伝子発現は大きく再活性化することが明らかとなった。そこで、これらの刺激による再活性化メカニズムについて解析を行った。HD法で投与したマウス肝臓は、一時的に容積が2倍以上にもなることから、細胞骨格が変化することが推察された。そこで、形態的な変化について、電子顕微鏡画像で評価したところ、HD法で溶液を投与したマウス肝臓では、肝細胞間の間隙が拡大し、細胞の形状も変化していることが示された。そこで、F-アクチンに特異的に結合するphalloidinを用いて細胞の形態変化に重要なF-アクチンの細胞内分布を評価した結果、HD法で等張溶液を投与したマウスではF-アクチンの一時的な脱重合が観察された。しかしながら、培養細胞を用いた検討では、低張溶液での培養による細胞容積の増大時に遺伝子発現の再活性化現象は一部細胞でしか認められなかった。以上より、HD法による遺伝子導入や再活性化時には細胞が形態学的に変化するものの、この変化は再活性化現象とは直接的には関与しないことが示唆された。

Treatment of the disease type "Necessary treatment"ム』の実appearsをpurposeに、缝子発appears to reactivate のためのシグナルExplore the mechanism to explain and try みた.まず, liver stasis speed やかに inactivated されるCMV プロモータをcontaining むプラスミドを adopts し, liver stasis 々のstimulationすることで, することで, reactivation, stimulation, exploration, and action.その result, large volume isotonic solution, rapid intravascular administration, するハイドロダイナミクス (HD) method, accurate じたadministration, にplus えて, hepatic stasis pressure, electrolysisパルスなど、ganzai への伝子 import method として useful であることが reportされているmethodが、缝子発appearをreactivationしうることを见出した. Previous 検検において, HD method による reactivation には, liver 蓓でのNF-kappaB やAP-1のActivation is related to することが Showing されていたことから, これら転WRITE factor をActivation することが知らLiver blood deficiency, reperfusion (I/R), reactivation and reactivation of reperfusion (I/R) effectsろ、このI/Rによっても liver 臓での伝子発 appear は大きく reactivation することが明らかとなった.そこで、これらのstimulationによるReactivationメカニズムについてanalytic を行った. The HD method involves the administration of liver stasis, the temporary volume of 2 times or more, and the analysis of changes in cytoskeletal structure.そこで, morphological change of な変化について, electronic micromirror image evaluation, HD method and solution injection The spaces between liver cells are large and the spaces between liver cells are large, and the shape of cells is changed.そこで、F-アクチンにSpecific にconjugation するphalloidinをUsing いてcell morphological change is importantなF-アクチンのIntracellular distribution evaluation results, HD method, isotonic solution administration, and F-アクチンの temporary detoxification and superposition inspection.しかしながら, cultured cells いた検では, hypotonic solution でのculture による cell volume When the accumulation increases, the phenomenon of reactivation occurs and the cells are recognized and recognized. The morphology of the cells was modified when the above-mentioned DNA and HD methods were introduced and reactivated. The phenomenon of ものの, この変化は reactivation and とは are directly linked to the しないことが Show された.