Molekularer Mechanismus der TLR2-vermittelten Interleukin-10 Induktion durch das V-Antigen (LcrV) humanpathogener Yersinien

在人源性耶尔森氏菌中，三种致病性耶尔森氏菌的病毒抗原（V-Antigen，LcrV）与巨噬细胞白细胞介素-10（IL-10）中的CD 14和Toll样受体2（TLR 2）相互作用。IL-10有助于抑制TNF-α和其他细胞因子。尤伯杯这一机制könnten sich Yersinien der angeborenen Immunität des Wirtes entziehen. Das beantragte Forschungsprojekt befaßt sich mit der Charakterisierung der TLR2-benksamen Domäne des LcrV von Yersinia enterocolitica und der Bedeutung dieser Domäne für die Yersinienpathogenese im Mausinfektionsmodell：1. Mittels rekbinanter LcrV-Teilbereiche，die gesamte LcrV abdecken，soll geprüft韦尔登，ob es neben dem von uns identifizierten TLR 2-Aminosäuren（AS）-Bereich 31-57 noch weitere TLR-aminosame Bereiche gibt.使用LcrV-凝胶乳胶珠和链霉亲和素-生物素-verknüpften LcrV-寡肽（LcrV-寡肽四聚体）的溶液进行韦尔登试验，也可以通过LcrV的TLR 2-vermittelte Signaltransduktion检测CD 14。2.从AS-Bereich 31-57合成寡肽变异体的方法可用于识别韦尔登的TLR 2信号转导（LcrV的肽识别，LcrV-变异肽的活性测定）。该肽的活性可以通过与LcrV基因TLR 2-非特异性LcrVV-变异体的结合或特异性突变而得到韦尔登。我们必须用YVLcrVV来代替Yersinien，Yops zezernieren和zu translozieren，sowie auf Mauschenz untersucht韦尔登。3. Ein weiterer Projektteil befaßt sich mit der möglichen kontaktunabhängigen“Fernandekung”von sezerniertem LcrV auf Immunzellen und einer möglichen zytoplasmatischen Wirkung von LcrV（Interaktion mit Nod）.

Das auf dem Virulenzplasmid pYV aller drei humanpathogenen Yersinien kodierte Virulenz-Antigen (V-Antigen, LcrV) induziert über Interaktion mit CD14 und Toll-like Rezeptor 2 (TLR2) in Makrophagen Interleukin-10 (IL-10). IL-10 führt dann wiederum zur Suppression von TNF-a und anderen Zytokinen. Über diesen Mechanismus könnten sich Yersinien der angeborenen Immunität des Wirtes entziehen. Das beantragte Forschungsprojekt befaßt sich mit der Charakterisierung der TLR2-wirksamen Domäne des LcrV von Yersinia enterocolitica und der Bedeutung dieser Domäne für die Yersinienpathogenese im Mausinfektionsmodell: 1. Mittels rekombinanter LcrV-Teilbereiche, die das gesamte LcrV abdecken, soll geprüft werden, ob es neben dem von uns identifizierten TLR2-wirksamen Aminosäuren (AS)-Bereich 31-57 noch weitere TLR-wirksame Bereiche gibt. Weiter soll mit Hilfe von LcrV-gekoppelten Latexbeads und Streptavidin-Biotin-verknüpften LcrV-abgeleiteten Oligopeptiden (Tetramerisierung von LcrV-abgeleiteten Oligopeptiden) getestet werden, ob auch ohne die Anwesenheit von CD14 eine TLR2-vermittelte Signaltransduktion durch LcrV möglich ist. 2. Mittels synthetischer Oligopeptidvarianten aus dem AS-Bereich 31-57 sollen die für die über TLR2 vermittelte Signaltransduktion verantwortlichen AS identifiziert werden (Peptidkartierung von LcrV, Aktivitätsbestimmung von LcrV-Variantenpeptiden). Die Ergebnisse der Peptidkartierung sollen verwendet werden, um durch ortsspezifische Mutagenese des lcrV Gens TLR2-unwirksame LcrVV-Varianten rekombinant herzustellen. Darüberhinaus sollen Yersinien mit pYVLcrVV auf ihre Fähigkeit, Yops zu sezernieren und zu translozieren, sowie auf Mausvirulenz untersucht werden. 3. Ein weiterer Projektteil befaßt sich mit der möglichen kontaktunabhängigen "Fernwirkung" von sezerniertem LcrV auf Immunzellen und einer möglichen zytoplasmatischen Wirkung von LcrV (Interaktion mit Nod).