ｉＰＳ細胞由来の造血幹細胞を利用した再生不良性貧血自己抗原の同定

使用 iPS 细胞来源的造血干细胞鉴定再生障碍性贫血中的自身抗原

• 批准号: 14F04419
• 负责人: 中尾 眞二
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-25 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14F04419/
• 关键词: 再生不良性貧血; 細胞傷害性T細胞; iPS細胞; CD34陽性細胞; 6pLOH陽性細胞; T細胞レセプター; HLA-Bアレル; 6pLOH; 造血前駆細胞; 自己抗原; HLA-B*40:02; 6pUPD; 造血幹細胞

平成27年度までの研究により、シクロスポリン（CsA）依存性の1例（KANA1）と、CsAで改善した1例（KANA6）から、6pLOH(+)、6pLOH(-)（野生型）、HLA-Bアレル（B4002またはB5401）単独欠失の3種類のiPS細胞クローンを樹立することに成功した。これらのiPS細胞を種々の造血因子の存在下で3週間培養することにより、約70%のCD34陽性細胞を含む造血前駆細胞集団が誘導された。KANA1由来の野生型CD34 陽性細胞で患者自身のCD8陽性T細胞を刺激することにより、野生型CD34陽性細胞のみを選択的に傷害する細胞傷害性T細胞（CTL）株が誘導された。このCTL株からCTLクローンの樹立を試みたが、増殖が不良で、維持することが困難であったため、CTL株のT細胞レセプター（TCR）レパトアを解析し、頻度の高いTCRβ鎖陽性T細胞からTCRα鎖β鎖のcDNAを作製した。このうち1種類のTCRモチーフは、初発時に保存されていた骨髄T細胞でもっとも頻度の高いCD8陽性PD-1陽性T細胞中のTCRモチーフと一致していた。このｃDNAを用いてJurkat細胞のトランスフェクタントを作製し、野生型CD34陽性細胞に対する特異性を現在検討している。一方、KANA6については、未輸血・無治療状態の骨髄が保存されていたため、PD-1陽性CD137陽性T細胞分画から単一細胞ソーティングを行い、頻度の高い4種類のTCRモチーフcDNAを用いて、KANA1と同様にJurkat細胞にトランスフェクトした。作製された4種類のトランスフェクタントは、野生型CD34陽性細胞には反応したが、B5401欠失CD34陽性細胞には反応しなかった。このため、現在CD34陽性細胞からcDNAライブラリーを作製し、HLA-B*54:01をトランスフェクトしたCOS細胞への導入を準備している。

In 2007, we successfully established three types of iPS cell lines that were isolated from each other, including one case of CsA dependence (KANA1), one case of CsA improvement (KANA6), 6pLOH(+), 6pLOH(-)(wild-type), and HLA-B (B4002 and B5401). About 70% of the CD34-positive cells were cultured in the presence of hematopoietic factors for 3 weeks. KANA1 is derived from wild-type CD34-positive cells and is induced by stimulation of the patient's own CD8-positive T cells, and by selective injury of wild-type CD34-positive cells. This CTL strain is difficult to establish, proliferate, maintain, and resolve TCR beta lock positive T cells with high frequency. TCR in CD8-positive PD-1-positive T cells is consistent with TCR in CD8-positive PD-1-positive T cells. The specificity of this cDNA for Jurkat cells and wild-type CD34-positive cells was investigated. One side, KANA6, no transfusion, no treatment state of bone marrow preservation, PD-1 positive CD137 positive T cell analysis, single cell, high frequency of four types of TCR cDNA use, KANA1 and the same Jurkat cell. 4 species of CD34-positive cells were isolated from wild type CD34-positive cells and B5401-negative CD34-positive cells CD34 positive cells are now ready to be introduced into COS cells.

项目成果

Epstein-Barr virus-associated leukemic lymphoma after allogeneic stem cell transplantation.

同种异体干细胞移植后的 Epstein-Barr 病毒相关白血病淋巴瘤。

• DOI: 10.1016/j.jcv.2016.04.020
• 发表时间: 2016
• 期刊: J Clin Virol
• 影响因子: 8.8
• 作者: Takamatsu H;Araki R;Nishimura R;Yachie A;Espinoza JL;Okumura H;Yoshida T;Kuzushima K;Nakao S
• 通讯作者: Nakao S

Microbe-Induced Inflammatory Signals Triggering Acquired Bone Marrow Failure Syndromes.

• DOI: 10.3389/fimmu.2017.00186
• 发表时间: 2017
• 期刊: Frontiers in immunology
• 影响因子: 7.3
• 作者: Espinoza JL;Kotecha R;Nakao S
• 通讯作者: Nakao S

Somatic Mutations and Clonal Hematopoiesis in Aplastic Anemia.

• DOI: 10.1056/nejmoa1414799
• 发表时间: 2015-07-02
• 期刊: The New England journal of medicine
• 作者: Yoshizato T;Dumitriu B;Hosokawa K;Makishima H;Yoshida K;Townsley D;Sato-Otsubo A;Sato Y;Liu D;Suzuki H;Wu CO;Shiraishi Y;Clemente MJ;Kataoka K;Shiozawa Y;Okuno Y;Chiba K;Tanaka H;Nagata Y;Katagiri T;Kon A;Sanada M;Scheinberg P;Miyano S;Maciejewski JP;Nakao S;Young NS;Ogawa S
• 通讯作者: Ogawa S

Induced pluripotent stem cell technology: A window for studying the pathogenesis of acquired aplastic anemia and possible applications.

• DOI: 10.1016/j.exphem.2016.12.011
• 发表时间: 2017-05
• 期刊: Experimental hematology
• 影响因子: 2.6
• 作者: M. Elbadry;M. Elbadry;J. Espinoza;S. Nakao

Generation of Ips Cell-Derived Hematopoietic Progenitor Cells from Patients with Acquired Aplastic Anemia Harboring Copy Number Neutral Loss of Heterozygosity of the Short Arm of Chromosome 6.

从具有 6 号染色体短臂杂合性拷贝数中性缺失的获得性再生障碍性贫血患者中产生 Ips 细胞来源的造血祖细胞。

• 发表时间: 2015
• 作者: Luis Espinoza;Yoshinori Yoshida;Kazuhisa Chonabayashi;Takamasa Katagiri;Yoshitaka Zaimoku and Shinji Nakao.
• 通讯作者: Yoshitaka Zaimoku and Shinji Nakao.