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動物細胞内シグナル伝達におけるカルシウム応答性アダプタータンパク質の機能解析

钙反应接头蛋白在动物细胞内信号转导中的功能分析

基本信息

批准号：
14J09452
负责人：
京卓志
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J09452/
关键词：
タンパク質間相互作用カルシウム結合タンパク質小胞輸送

项目摘要

申請書にって、カルシウム結合タンパク質ALG-2とTFGの相互作用が初期分泌経路において果たす役割を検討した。昨年度までに、ALG-2の過剰発現によってTFGのERES局在が顕著になる結果が得られており、その効果とERストレス及びTFG発現量との関連を調べた。まず、ALG-2の過剰発現によって、ERストレスが惹起されるかを調べるために、ALG-2を過剰発現させた細胞のERストレスマーカーの発現量を調べた。ALG-2の過剰発現によってERストレスマーカーの発現が増加しなかったことから、ALG-2の過剰発現とERストレスとの関連は見出されなかった。次に、ALG-2過剰発現細胞におけるTFGの発現量をウエスタンブロッィングで調べた。しかし、ALG-2を過剰発現した細胞と過剰発現していない細胞間で、TFGの量の差はみられなかった。以上の結果から、TFGの局在に対するALG-2過剰発現の効果は、ERストレス及び、TFGの発現量の変化とは独立していることが考えられた。続いて、TFGのさらなる機能解明に向けて、TFGの新規相互作用タンパク質の探索を行った。その結果、TFGの新規相互作用タンパク質候補としてTRAF3を同定した。GFP-TFGとHA-TRAF3を共発現させたHEK293細胞から溶解液を調製し、抗GFP抗体による免疫沈降を行った結果、HA-TRAF3が共沈降した。このことから、TRAF3はTFGと相互作用することが確認された。さらに、免疫染色を行った結果、ゴルジ体様の局在パターンである核の周囲において、GFP-TFGの蛍光シグナルとHA-TRAF3の免疫染色シグナルが部分的に一致した。以上の結果から、初期分泌経路においてTFGとTRAF3の相互作用が何らかの役割を果たす可能性が示唆された。

Application form, カって, カルシウム combines the タンパクquality ALG-2 and とTFG のinteraction が Initial secretion road において Fruit たす丫検した. Yesterday's year, ALG-2's past and present, TFG's ERES Bureau is in progress. As a result, the results are られており, そのeffect とERストレス, and びTFG発现quantity とのrelated を Adjustment べた.まず、ALG-2のpassing剰発appears によって、ERストレスがcauses されるかを动べるために, ALG-2 is a ER that has passed the test. ALG-2 の剰発appearsによってERストレスマーカーの発appearsがincreaseしなかったことから、ALG-2のpass剰発appearとERストレスとのrelatedは见出されなかった. Secondly, ALG-2 has passed through the cells and the amount of TFG has been reduced.しかし, ALG-2 を剰発appears したcell とpass 剰発appears していないbetween cells で, TFG のquantity の difference はみられなかった. The result of the above is the result of TFG, and the result of ALG-2 is the same as that of TFG. ERストレス和び、TFGの発真人の変化とはINDEPENDENT していることが考えられた.続いて, TFG's functional explanation, TFG's new regulation interaction, exploration and action. The results of その, TFG's new rules interaction タンパクqualitative candidate としてTRAF3を同定した. The results of GFP-TFG and HA-TRAF3 co-precipitation and the preparation of HEK293 cell lysates, immunoprecipitation of anti-GFP antibodies, and co-precipitation of HA-TRAF3 were obtained. The interaction between TRAF3 and TFG is confirmed.さらに, immunostaining を行った results, ゴルジ体様のbureau in パターンである Kernel のweek囲において, G FP-TFG's light staining and HA-TRAF3's immunostaining are consistent with each other. The above results indicate that the initial secretion path and the interaction between TFG and TRAF3 are possible and that the results are possible.