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動物細胞内シグナル伝達におけるカルシウム応答性アダプタータンパク質の機能解析

钙反应接头蛋白在动物细胞内信号转导中的功能分析

基本信息

批准号：
14J09452
负责人：
京卓志
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J09452/
关键词：
タンパク質間相互作用カルシウム結合タンパク質小胞輸送

项目摘要

申請書にって、カルシウム結合タンパク質ALG-2とTFGの相互作用が初期分泌経路において果たす役割を検討した。昨年度までに、ALG-2の過剰発現によってTFGのERES局在が顕著になる結果が得られており、その効果とERストレス及びTFG発現量との関連を調べた。まず、ALG-2の過剰発現によって、ERストレスが惹起されるかを調べるために、ALG-2を過剰発現させた細胞のERストレスマーカーの発現量を調べた。ALG-2の過剰発現によってERストレスマーカーの発現が増加しなかったことから、ALG-2の過剰発現とERストレスとの関連は見出されなかった。次に、ALG-2過剰発現細胞におけるTFGの発現量をウエスタンブロッィングで調べた。しかし、ALG-2を過剰発現した細胞と過剰発現していない細胞間で、TFGの量の差はみられなかった。以上の結果から、TFGの局在に対するALG-2過剰発現の効果は、ERストレス及び、TFGの発現量の変化とは独立していることが考えられた。続いて、TFGのさらなる機能解明に向けて、TFGの新規相互作用タンパク質の探索を行った。その結果、TFGの新規相互作用タンパク質候補としてTRAF3を同定した。GFP-TFGとHA-TRAF3を共発現させたHEK293細胞から溶解液を調製し、抗GFP抗体による免疫沈降を行った結果、HA-TRAF3が共沈降した。このことから、TRAF3はTFGと相互作用することが確認された。さらに、免疫染色を行った結果、ゴルジ体様の局在パターンである核の周囲において、GFP-TFGの蛍光シグナルとHA-TRAF3の免疫染色シグナルが部分的に一致した。以上の結果から、初期分泌経路においてTFGとTRAF3の相互作用が何らかの役割を果たす可能性が示唆された。

In the early stage of the interaction of ALG-2 TFG, the secretory pathways were detected. Last year's election and ALG-2 results showed that the TFG ERES Bureau reported that the results showed that the results showed that there were significant errors in ER and TFG. ER, ALG-2, ER, ER, ALG-2, and so on, respectively. The ALG-2 filter does not require any additional information on the ER, and the ALG-2 filter does not cause any additional information on the ER performance. In the second and ALG-2 period, there is a significant increase in the amount of money in the TFG. The number of people living in the hospital, and the amount of money in the ALG-2 is poor. The results of the above results are as follows: the results of the above results, the results of the TFG Bureau, the results of ALG-2 testing, the results of ER testing, the results of the above results, the results of the TFG Bureau, and the results of the TFG Bureau. The mechanism of the interaction of new rules and regulations of TFG and TFG can be used to explore the interaction of new rules and regulations. The results of the test and the TFG new rule interaction are consistent with each other. The candidate TRAF3 is identical. The results of GFP-TFG HA-TRAF3 assay showed that HEK293 cell lysate, anti-GFP antibody immunoprecipitation assay and HA-TRAF3 co-precipitation assay were detected. The interaction between TRAF3 and TFG confirms that it is necessary to do so. The results of immunostaining, the results of immunostaining and the results of immunostaining. The above results show that the initial secretory pathway is responsible for the interaction of TFG and TRAF3, which indicates that there is a significant difference in the possibility of labor cutting.