Charakterisierung von Zielgenen und Interaktionen zweier partiell reduntanter Arabidopsis thaliana Polycomb-Gruppen-Proteine

两个部分冗余拟南芥多梳族蛋白的靶基因特征和相互作用

• 批准号: 5430745
• 负责人: Professor Dr. Daniel Schubert
• 金额: --
• 依托单位: School of Biological Sciences
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Fellowships
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2003-12-31 至 2006-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5430745?language=en
• 关键词: Charakterisierung; von; Zielgenen; und; Interaktionen

Polycomb/Trithorax-Gruppen (Pc-/Trx-G) Protein Komplexe sind entscheidend an der Pflanzen- und Tier-Entwicklung beteiligt, indem sie Histon Methylierung katalysieren. Das Arabidopsis thaliana Genom enthält drei Gene, die für homologe Proteine der Drosophila Histon Methyltransferase ENHANCER OF ZESTE (E(Z)) kodieren: CURLY LEAF (DLF), MEDEA und das nur wenig charakterisierte CURLY LEAF-LIKE (CLK). Pflanzliche E(Z)-ähnliche Proteine wurden mit zwei Strategien charakterisiert: bei einem Hefe Zwei-Hybried Experiment konnten wir als mögliche Interaktionspartner von CLF Pc-G Proteine und Proteine isolieren, die vermutlich Chromatin modifizieren. Weiterhin konnten wir zeigen, dass clk Mutanten keinen sichtbaren Phänotypen aufweisen, aber den clf Phänotypen erheblich verstärken: clk clf Doppelmutanten sind winzig, bilden Strukturen, die somatischen Embryos ähneln, und zeigen weitere Anomalien. Studien der Funktion von CLF und CLK können daher nur dann aussagekräftig sein, wenn die Funktion beider Proteine und ihrer Interaktionen vergleichend analysiert wird. Dies wird eine morphologische Charakterisierung enthalten. Die Expression möglicher Zielgene von CLF/CLK wird mit RT-PCR und Reportergen-Konstrukten in den Doppelmutanten untersucht werden. Chromatin Immmunopräzipitation wird nachweisen, ob CLF und CLK direkt mit den Zielgenen assoziert sind. Hefe Zwei-Hybrid Analysen werden zeigen, ob CLK vergleichbare Interaktionspartner wie CLF aufweist. Zusätzlich werden Linien, die T-DNA Insertionen in Genen der möglichen CLF Partner haben, mit clf und clk Mutanten gekreuzt werden, um genetische Interaktionen zu ermitteln.

Polycomb/Trichorax-Gruppen（Pc-/Trx-G）Protein Komplex sind entscheidend an der Pflanzen- und Tier-Entwicklung beteiligt，indem sie希斯顿Methylierung katalysieren. Das Arabidopsis thaliana Genom enthält drei Gene，die für homolog Proteine der Drosophila希斯顿Methyltransferase ENHANCER OF Zeste（E（Z））kodieren：卷曲叶（DLF），MEDEA and das努尔wenig charakterisierte卷曲叶样（CLK）. Pflanzliche E（Z）-ahnliche Proteine wurden mit twei plugien charakterisiert：bei enem Hefe Zwei-Hybrid Experiment konnten als mögliche Interaktionspartner von CLF Pc-G Proteine und Proteine isolieren，die vermutlich Chromatin modifizieren.我们知道，突变体不会使Phänotypen增加，但可以通过观察Phänotypen的变化来理解：双突变体是一种扭曲的、结构化的、胚胎的躯体化的，并且还存在异常。CLF和CLK的功能只需要简单地分析一下，如果这些功能与Proteine和他们的Interaktionen的功能相同，那么就可以进行分析。它们具有明显的形态特征。采用RT-PCR和报告基因构建技术对CLF/CLK的Zielgene表达进行了韦尔登。染色质免疫反应将在CLF和CLK直接与Zielgenen assoziert sind. Hefe Zwei-混合分析韦尔登zeigen，ob CLK vergleichbare Interaktionspartner wie CLF aufweist.因此，韦尔登公司，T-DNA插入在基因的möglichen CLF合作伙伴已经，与clf和突变的gekreuzt韦尔登，um genetische Interaktionen zu ermitteln。