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Funktionelle Charakterisierung von Mediatoren und Zielgenen des "crosstalks" zwischen TGFß- und Ras-Signalkaskaden im Pankreaskarzinom

胰腺癌中 TGFα 和 Ras 信号级联之间“串扰”的介质和靶基因的功能特征

基本信息

批准号：
68523282
负责人：
Professor Dr. Malte Buchholz
金额：
--
依托单位：
Zentrum für Tumor- und Immunbiologie (ZTI)
依托单位国家：
德国
项目类别：
Research Grants
财政年份：
2008
资助国家：
德国
起止时间：
2007-12-31 至 2011-12-31
项目状态：
已结题

来源：
https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/68523282?language=en
关键词：
Funktionelle Charakterisierung von Mediatoren und

项目摘要

Im Rahmen eines laufenden Projektes haben wir in hoch-parallelisierten Zell-basierten Assays eine große Anzahl von neuen Pankreaskarzinom-Kandidatengenen auf bisher unbekannte Tumor-relevante Funktionen getestet. Insgesamt wurden 14 vielversprechende Kandidaten für weitergehende detaillierte Analysen ausgewählt. Eine erste Publikation zur Rolle des Kandidatengens Galectin-3 (Gal-3) im Pankreaskarzinom ist bereits erschienen (Hann et al., 2011); zwei weitere Manuskripte zu neuen onkogenen Funktionen von Cofilin-1 und FASTK sind eingereicht bzw. in Vorbereitung. Als einer der interessantesten Kandidaten erschien in diesem Zusammenhang das Gen placenta-specific 8 (Plac8), das für ein kleines Protein mit einer Masse von ca. 16 KDa kodiert, dessen physiologische Funktion bisher unbekannt ist. Unsere bisherigen Untersuchungen zeigen, dass Plac8 weder im gesunden noch im entzündlich veränderten Pankreas anzutreffen ist, jedoch in mindestens 70 % der invasiven Adenokarzinome des Pankreas stark überexprimiert wird. Interessanterweise findet sich die gleiche Situation in transgenen Mausmodellen des Pankreaskarzinoms, in denen in der Folge der Pankreas-spezifischen Aktivierung von onkogen mutiertem K-Ras duktale Adenokarzinome mit starker ektopischer Expression von murinem Plac8 entstehen.RNAi-vermittelter knockdown der Plac8-Expression führte zu einer massiven Inhibition der Proliferation in allen untersuchten Pankreaskarzinom-Zelllinien, die sich auch in einer signifikant verminderten Fähigkeit der Zellen zu substratunabhängigem Wachstum äußerte. Apoptoseraten waren hingegen nicht verändert. Durchflusszytometrische Untersuchungen ergaben, dass sowohl der G1/S- als auch der G2/M-Phasenübergang im Zellzyklus nach Plac8-knockdown verlangsamt waren. Da die molekulare Funktion von Plac8 bisher völlig ungeklärt ist, existieren bisher jedoch keine Anhaltspunkte dafür, über welche Mechanismen diese Effekte vermittelt werden.In dem hier beantragten Projekt sollen diese molekularen Mechanismen aufgeklärt und somit auch mögliche neue Ansatzpunkte für therapeutische Interventionen identifiziert werden. In Zusammenarbeit mit Kooperationspartnern sollen hierbei unter anderem reverse phase protein arrays eingesetzt werden, um Veränderungen in zellulären Signalkaskaden nach Plac8-knockdown zu charakterisieren. Metabolische Markierung von Proteinen mit stabilen Isotopen (SILAC) mit anschließender Plac8-Immunpräzipitation und massenspektroskopischen Analysen soll eingesetzt werden, um direkte Interaktionspartner von Plac8 zu identifizieren. Parallel dazu sollen gut definierte transgene Mausmodelle des Pankreaskarzinoms auf den generalisierten Plac8-knockout-Hintergrund gezüchtet werden, um die Auswirkungen des Wegfalls der ektopischen Plac8-Expression auf die Entstehung und Progression von Pankreastumoren bzw. Vorläuferläsionen zu analysieren.

在Rahmen， laufenden项目已经在这些并行的zell - based分析中进行了研究，在新的pankreaskarzinm -候选基因中，在肿瘤相关功能测试中进行了研究。Insgesamt wurden 14 vilelversprechende候选人<e:1> r weitergehende细节分析ausgewählt。生物医学工程学报：Galectin-3 (Gal-3) in Pankreaskarzinom ist bereits erschienen (Hann et al., 2011)；[2][1][1][1][1][1][1][1][3]。在Vorbereitung。Als einer der interessantesten candidaten erschien in diesem Zusammenhang das Gen placenta-specific 8 (Plac8), das f<s:1> r ein kleines Protein mit einer Masse von ca. 16 KDa kodiert, desessen physiology funkher unbekant ist。unserere bisherigen Untersuchungen zeigen, pass Plac8 weder im gesunden noch im entzndlich veränderten Pankreas anzutreffen ist， jedoch in mindestens 70% der侵入性Adenokarzinome des Pankreas stark <e:1>为实验风。此外，我们还发现了在转基因的maosmoellen des Pankreaskarzinoms中，在转基因的Folge der pankreasspezifischen Aktivierung von onkeogen多项目K-Ras duktale Adenokarzinome和小鼠Plac8的表达中，存在着明显的差异。RNAi-vermittelter基因敲低位点-表达<e:1>与大量抑制增殖的关系，如在其他显著的害虫Fähigkeit der Zellen zu substratunabhängigem Wachstum äußerte中。细胞凋亡观察：基因夜verändert。Durchflusszytometrische Untersuchungen ergaben，在Zellzyklus nach plac8敲低的verlangsamt ware中，通过G1/S-和G2/ m - phasenen<e:2>，筛选G1/S-和G2/ m - phasenen。分子的作用与作用〔〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕〔1〕在他们的研究项目中，疾病分子机制aufgeklärt和一些研究成果，如mögliche . neue Ansatzpunkte <s:2>治疗干预鉴定。在Zusammenarbeit mit kooperationpartnern sollen hierbei下，在anderem反相蛋白阵列下，研究了Veränderungen在zellulären中Signalkaskaden每个plac8敲除的特征。代谢标记（Metabolische Markierung von Proteinen mit stabilen isoopen， SILAC） mit anschließender Plac8-Immunpräzipitation and massenspektroskopischen Analysen solingesetzt werden, um direct interaktionpartner von Plac8 zu identifizien。平行大鼠肠道定义转基因Mausmodelle des pankastkarzinoms auf of den generisierten plac8敲除- hintergrund gezchtet werden， um die Auswirkungen des Wegfalls der ektopischen plac8 -表达auf die Entstehung和进展von pankastumenren bzw。Vorläuferläsionen zu analysieren。