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Funktionelle Charakterisierung von Mediatoren und Zielgenen des "crosstalks" zwischen TGFß- und Ras-Signalkaskaden im Pankreaskarzinom

胰腺癌中 TGFα 和 Ras 信号级联之间“串扰”的介质和靶基因的功能特征

基本信息

批准号：
68523282
负责人：
Professor Dr. Malte Buchholz
金额：
--
依托单位：
Zentrum für Tumor- und Immunbiologie (ZTI)
依托单位国家：
德国
项目类别：
Research Grants
财政年份：
2008
资助国家：
德国
起止时间：
2007-12-31 至 2011-12-31
项目状态：
已结题

来源：
https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/68523282?language=en
关键词：
Funktionelle Charakterisierung von Mediatoren und

项目摘要

Im Rahmen eines laufenden Projektes haben wir in hoch-parallelisierten Zell-basierten Assays eine große Anzahl von neuen Pankreaskarzinom-Kandidatengenen auf bisher unbekannte Tumor-relevante Funktionen getestet. Insgesamt wurden 14 vielversprechende Kandidaten für weitergehende detaillierte Analysen ausgewählt. Eine erste Publikation zur Rolle des Kandidatengens Galectin-3 (Gal-3) im Pankreaskarzinom ist bereits erschienen (Hann et al., 2011); zwei weitere Manuskripte zu neuen onkogenen Funktionen von Cofilin-1 und FASTK sind eingereicht bzw. in Vorbereitung. Als einer der interessantesten Kandidaten erschien in diesem Zusammenhang das Gen placenta-specific 8 (Plac8), das für ein kleines Protein mit einer Masse von ca. 16 KDa kodiert, dessen physiologische Funktion bisher unbekannt ist. Unsere bisherigen Untersuchungen zeigen, dass Plac8 weder im gesunden noch im entzündlich veränderten Pankreas anzutreffen ist, jedoch in mindestens 70 % der invasiven Adenokarzinome des Pankreas stark überexprimiert wird. Interessanterweise findet sich die gleiche Situation in transgenen Mausmodellen des Pankreaskarzinoms, in denen in der Folge der Pankreas-spezifischen Aktivierung von onkogen mutiertem K-Ras duktale Adenokarzinome mit starker ektopischer Expression von murinem Plac8 entstehen.RNAi-vermittelter knockdown der Plac8-Expression führte zu einer massiven Inhibition der Proliferation in allen untersuchten Pankreaskarzinom-Zelllinien, die sich auch in einer signifikant verminderten Fähigkeit der Zellen zu substratunabhängigem Wachstum äußerte. Apoptoseraten waren hingegen nicht verändert. Durchflusszytometrische Untersuchungen ergaben, dass sowohl der G1/S- als auch der G2/M-Phasenübergang im Zellzyklus nach Plac8-knockdown verlangsamt waren. Da die molekulare Funktion von Plac8 bisher völlig ungeklärt ist, existieren bisher jedoch keine Anhaltspunkte dafür, über welche Mechanismen diese Effekte vermittelt werden.In dem hier beantragten Projekt sollen diese molekularen Mechanismen aufgeklärt und somit auch mögliche neue Ansatzpunkte für therapeutische Interventionen identifiziert werden. In Zusammenarbeit mit Kooperationspartnern sollen hierbei unter anderem reverse phase protein arrays eingesetzt werden, um Veränderungen in zellulären Signalkaskaden nach Plac8-knockdown zu charakterisieren. Metabolische Markierung von Proteinen mit stabilen Isotopen (SILAC) mit anschließender Plac8-Immunpräzipitation und massenspektroskopischen Analysen soll eingesetzt werden, um direkte Interaktionspartner von Plac8 zu identifizieren. Parallel dazu sollen gut definierte transgene Mausmodelle des Pankreaskarzinoms auf den generalisierten Plac8-knockout-Hintergrund gezüchtet werden, um die Auswirkungen des Wegfalls der ektopischen Plac8-Expression auf die Entstehung und Progression von Pankreastumoren bzw. Vorläuferläsionen zu analysieren.

我们在高平行的Zell-baserten检测中发现了一个新的Pankreaskarzinom-Kandidatenenen的大样本，该样本与肿瘤相关的功能检测结果无关。Insgesamt wurden 14 vielversprechende Kandidaten für weitergehende detaillierte Analysen ausgewählt.第一次公开了半乳糖凝集素-3（Gal-3）在Pankreaskarzinom中的作用（Hann等人，2011）; zweitere Manuskripte zu neuen onkogenen Funktionen von Cofilin-1 und FASTK sind eingereicht bzw.在Vorbereitung。在胎盘特异性基因8（Plac 8）中，有一种有趣的Kandidaten研究。16 KDa的剂量，其生理功能更好。在我们的调查中，第8位候选人在进一步调查Pankreas和Treffen时发现，70%的Pankreas腺病毒感染率将急剧上升。有趣的是，我们发现转基因Pankreaskarzinoms的Mausmodellen中的一个有趣的情况，在带有小鼠Plac 8的明显表达的肿瘤细胞K-Ras的特异性激活中，RNAi-vermittelter knockdown Plac 8-Expression führte zuiner艾伦Pankreaskarzinom-Zelllinien中的增殖抑制，这一点也体现在泽伦的一种重要的有害物质中。凋亡是不可能的。通过对G1/S-的动力学研究，G2/M-相在Zellzyklus中的动力学研究也表明了Plac 8-敲除的有效性。Da die molekulare Funktion von Plac8 bisher völlig ungeklärt ist，prostiteren bisher jedoh neither Anhaltspunkte dafür，über welche Mechanismen diese Effekte vermittelt韦尔登.In dem biantragten Project sollen diese molekularen Mechanismen aufgeklärt und somit auch mögliche neue Ansatzpunkte für therapeutische Interventionen identifiziert韦尔登.在Zusammenarbeit mit Cooperationspartnern中，解决了以下问题：反相蛋白阵列，韦尔登，在Plac 8-knockdown zu charakterisieren中验证zellulären Signalkaskaden。采用稳定同位素（SILAC）进行蛋白质代谢标记，并采用Plac 8免疫纯化和质谱分析，以确定韦尔登的Plac 8直接相互作用伙伴。平行地，通过将Pankreaskarzinoms的肠道确定性转基因Mausmodelle用于将Plac 8-knockout-Hintergrund韦尔登中，以获得Pankreaskarzinoms的肠道确定性转基因Mausmodelle，从而促进Pankreaskarzinoms的表达和进展。Vorläuferläsionen zu analysieren.