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人工機能化核酸による進化分子工学の試み

人工機能化核酸による進化分子工学の試み
使用人工功能化核酸进行进化分子工程的尝试
批准号：
09878117
负责人：
伊藤 嘉浩
金额：
$1.22万
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1997 至 1998
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09878117/
关键词：
進化分子工学修飾核酸アプタマー分子センサーリボザイム生体高分子試験管内進化法RNAワールド核酸コンビナトリアル化学機能性高分子ホスト・ゲスト化学PCR法バインディング・アッセイ

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项目成果

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まず、天然の核酸モノマーを用い、進化分子工学によりターゲット分子を特異的に認識するオリゴ核酸が合成できるかを、サイロキシンをターゲット分子に選び、検討した。サイロキシンは甲状腺ホルモンのひとつで臨床分析上重要な化合物である。ランダム配列のオリゴDNAをサイロキシンを結合したゲル・カラムを通過させ、特異的に結合するDNAだけをPCR法で増幅するという操作を7回選別を繰り返すと、サイロキシンに結合するオリゴDNA集団が得られてきた(ターゲット分子に特異的に結合するオリゴヌクレオチドをアプタマーと称する)。得られたアプタマーは、サイロキシンと構造が類似しているリオチロニンには、殆ど結合しなかった。選別された集団のクローニングを行い、30クローンのDNA配列を決定した。すると8クローンに12塩基からなる共通配列が見いだされた。次にアミノ基や、蛍光基、ビオチニル基を側鎖に有するヌクレオチド三リン酸が進化分子工学の手法へ応用可能であることを明らかにした。すなわち、これらのヌクレオチド三リン酸はランダム配列のDNAを鋳型として転写反応でRNAに取り込まれ、このRNAは逆転写酵素によりDNAになりPCR法での増幅が可能であることがわかった。そこで側鎖にビオチニル基を有するシチジン三リン酸を用いて、進化分子工学によりアデノシン三リン酸(ATP)に結合するオリゴRNAを選別することに成功した。得られたアプタマーは側鎖に複数個のビオチニル基を有し、アビジンを用いて高い効率で検出が可能であった。このようにして人工的に機能化した核酸を用いて進化分子工学が可能であることがわかった。
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会议论文
伊藤嘉浩: "Modified nucleic acid for systematic evolution of RNA ligands by exponential enrichment" J.Bioact.Comp.Polym.13. 114-123 (1998)
Yoshihiro Ito：“通过指数富集实现 RNA 配体系统进化的修饰核酸”J.Bioact.Comp.Polym.114-123 (1998)。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
川添直輝: "In vitro selection of a DNA aptamer binding to thyroxine" Bull.Chem.Soc.Jpn.71. 1699-1703 (1998)
Naoki Kawazoe：“结合甲状腺素的 DNA 适体的体外选择”Bull.Chem.Soc.Jpn.71 1699-1703 (1998)。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
伊藤嘉浩: "バイオテクノロジーによる精密重合の展開-遺伝子工学の拡張と進化分子工学" 高分子論文集. 10. 596-607 (1997)
Yoshihiro Ito：“通过生物技术发展精密聚合——基因工程和进化分子工程的扩展”Polymer Journal 10. 596-607 (1997)。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Y.Ito, N.Kawazoe, N.Teramoto, K.Inada, Y.Imanishi: "Modified nuckic acid for systematic exponential ligand enrichment" J.Bioact.Compt.Polym.(印刷中). (1998)
Y.Ito、N.Kawazoe、N.Teramoto、K.Inada、Y.Imanishi：“用于系统指数配体富集的修饰核酸”J.Bioact.Compt.Polym.（出版中）。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
共 11 条
    Development of immune check point inhibitor using multi-valent effect
    Multimodal cancer therapy by combination of immune therapy and targeting nanostructured carrier containing anti-cancer drug
    創発的ビジネスモデル・イノベーションの知識創造・戦略形成プロセス・マネジメント
    • 批准号：
      20K01909
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
    • 资助金额：
      $2.75万
    • 财政年份：
      2020
    • 负责人：
      伊藤 嘉浩
    • 依托单位：
      Nagaoka University of Technology
    Development of polymeric immune checkpoint inhibitor by extension of low molecular weight compound
    • 批准号：
      20K20490
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Challenging Research (Pioneering)
    • 资助金额：
      $16.64万
    • 财政年份：
      2019
    • 负责人：
      伊藤 嘉浩
    • 依托单位：
      Institute of Physical and Chemical Research
    海外基金