眼内線維血管増殖性疾患の病態究明と治療薬開発

眼内纤维血管增生性疾病的病理学研究及治疗药物的开发

• 批准号: 15J03433
• 负责人: 小林 義行
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-24 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J03433/
• 关键词: 脈絡膜血管新生; テネイシン-C; テネイシン; 血管新生; 増殖糖尿病網膜症; 加齢黄斑変性

１．テネイシン-Cによる脈絡膜血管新生促進作用の検討(In vitroアッセイ):網膜下の血管である脈絡膜血管を想定してヒト微小血管内皮細胞を用いた実験を行った。リコンビナントテネイシン-C刺激によりヒト微小血管内皮細胞を刺激したところ細胞増殖、接着、遊走、管腔形成能がすべて促進した。また、テネイシン-C産生細胞である網膜色素上皮(RPE)細胞をリコンビナントテネイシン-Cで刺激したところ、細胞増殖能は促進したが、細胞接着能は抑制した。２．integrin阻害剤によるテネイシン-C依存性脈絡膜血管新生の抑制効果の検討(In vitroアッセイ):integrinαVβ3阻害剤であるCilengitideを用いてテネイシン-C依存性血管新生の抑制実験を行った。リコンビナントテネイシン-C刺激により促進した細胞増殖、接着、遊走、管腔形成能はCilengitideにより阻害された。３．テネイシン-C siRNAによるテネイシン-C依存性脈絡膜血管新生の抑制効果の検討(In vitroアッセイ):RPE細胞が産生したテネイシン-Cが直接血管内皮細胞に作用し血管新生を促進するかを検討するために、RPE細胞の培養上清を用いて検討を行った。まず、RPE細胞にテネイシンC siRNAまたは対照siRNAを導入し、リコンビナントTGF-β2で刺激し24時間後に一度培養液を交換した。さらに24時間培養し、できたRPE培養上清を用いて今度はヒト微小血管内皮細胞を培養して細胞増殖、管腔形成能を検討した。対照siRNA群ではTGF-β2刺激によりRPE培養上清中のテネイシン-C濃度は上昇し、微小血管内皮細胞の細胞増殖、管腔形成能は促進した。一方でテネイシンC siRNA群ではRPE培養上清中のテネイシン-C濃度は抑制され、対照siRNA群と比較して微小血管内皮細胞の細胞増殖、管腔形成能も抑制した。

1. テ ネ イ シ ン -c に よ る choroid angiogenesis promoting effect の 検 please (In vitro ア ッ セ イ) : の under the retinal vascular で あ る choroid blood vessels を scenarios し て ヒ ト を small vascular endothelial cells with い た be 験 を line っ た. リ コ ン ビ ナ ン ト テ ネ イ シ ン - C stimulate に よ り ヒ ト を small vascular endothelial cells stimulate し た と こ ろ cells raised colonization, then, can wander, lumen formed が す べ て promote し た. ま た, テ ネ イ シ ン - C cells で あ る retinal pigment epithelium (RPE) cells を リ コ ン ビ ナ ン ト テ ネ イ シ ン -c で stimulus し た と こ ろ, cell rights colonization can promote し は た が, cells then can suppress し は た. 2. Integrin resistance against tonic に よ る テ ネ イ シ ン - C dependency choroid neovascularization の inhibition of unseen fruit の 検 please (In vitro ア ッ セ イ) : integrin alpha V beta 3 resistance against tonic で あ る Cilengitide を with い て テ ネ イ シ ン - C dependency の angiogenesis inhibiting be 験 を line っ た. リ コ ン ビ ナ ン ト テ ネ イ シ ン - C stimulate に よ り promote し た cells raised colonization, then, can wander, lumen formed は Cilengitide に よ り resistance against さ れ た. 3 The inhibitory effect of テネ シ シ によるテネ -C siRNAによるテネ シ <s:1> -C dependent choroidal neovascularization <s:1> 検 Vitro ア ッ セ イ) : RPE cells が produce し た テ ネ イ シ ン -c が direct effect on vascular endothelial cell に し angiogenesis を promote す る か を beg す 検 る た め に, の RPE cell culture supernatant を with い て 検 line for を っ た. ま ず, RPE cells に テ ネ イ シ ン C siRNA ま た は polices according to siRNA を import し, リ コ ン ビ ナ ン ト TGF - beta 2 で stimulus し を に after 24 time once the culture exchange し た. さ ら に 24 time cultivating し, で き た RPE culture supernatant を with い て in degrees は ヒ ト small vascular endothelial cell を culture し て cells raised colonization, lumen formed を beg し 検 た. Stimulation of によ <s:1> TGF-β2 with siRNA group で シ in the culture supernatant of によ <s:1> RPE can lead to an <e:1> increase in the concentration of <s:1> テネ シ シ <s:1> -c, the proliferation of microvascular endothelial cells <s:1>, and the formation of lumen, which can promote <s:1> た. Party で テ ネ イ シ ン siRNA group C で は RPE in the culture supernatant の テ ネ イ シ ン - C concentration は inhibit さ れ, comparison group as siRNA と seaborne し て small vascular endothelial cells の rights colonization, lumen formation can be suppressed も し た.

项目成果

テネイシンCの脈絡膜血管新生への関与

Tenascin-C 参与脉络膜新生血管形成

• 发表时间: 2016
• 作者: 清家泰介;仁木宏典;D. Kurebayashi and K. Nomura;小林義行
• 通讯作者: 小林義行

テネイシンCの網膜血管新生への関与

Tenascin-C 参与视网膜血管生成

• 发表时间: 2015
• 作者: 小林義行;吉田茂生;周也荻;中間崇仁;石川桂二郎;有田量一;中尾新太郎;宮崎勝徳;大島裕司;佐々由季生;松田彰;向野利寛;石橋達朗
• 通讯作者: 石橋達朗

Tenascin-C promotes angiogenesis in fibrovascular membranes in eyes with proliferative diabetic retinopathy

• 发表时间: 2016-04
• 期刊: Molecular Vision
• 影响因子: 2.2
• 作者: Yoshiyuki Kobayashi;S. Yoshida;Yedi Zhou;Takahito Nakama;K. Ishikawa;Mitsuru Arima;S. Nakao;Y. Sassa;A. Takeda;T. Hisatomi;Y. Ikeda;A. Matsuda;K. Sonoda;T. Ishibashi

The role of tenascin-C in fibrovascular membrane formation in diabetic retinopathy

生腱蛋白-C 在糖尿病视网膜病变纤维血管膜形成中的作用

• 发表时间: 2015
• 作者: Yoshiyuki Kobayashi;Shigeo Yoshida;Yedi Zhou;Takahito Nakama;Keijiro Ishikawa;Ryoichi Arita;Shintaro Nakao;Yuji Oshima;Akira Matsuda;Tatsuro Ishibashi
• 通讯作者: Tatsuro Ishibashi

Tenascin-C secreted by transdifferentiated retinal pigment epithelial cells promotes choroidal neovascularization via integrin αV

• DOI: 10.1038/labinvest.2016.99
• 发表时间: 2016-11
• 期刊: Laboratory Investigation
• 影响因子: 5
• 作者: Yoshiyuki Kobayashi;S. Yoshida;Yedi Zhou;Takahito Nakama;K. Ishikawa;Yuki Kubo;Mitsuru Arima;S. Nakao;T. Hisatomi;Y. Ikeda;A. Matsuda;K. Sonoda;T. Ishibashi