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カイコを利用した有用タンパク質大量生産のための分子機構解明および新技術の開発

阐明蚕大量生产有用蛋白质的分子机制和新技术的开发

基本信息

批准号：
16J03624
负责人：
諸熊大輔
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-22 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

3つのテーマについて①エンドグリコシダーゼを利用した糖鎖加工については、引き続きカイコバキュロウイルス発現系を用いてエンドグリコシダーゼのクローニングおよび、その変異体の作成に取り組み、発現量や加水分解活性および糖転移活性の変化を確認した。また、新規酵素として、カイコ由来のエンドグリコシダーゼ (EndoBm)の開発に取り組んだ。その結果、EndoBmがカイコ内在性の特定の糖鎖構造に対して作用する可能性が確認された。②バキュロウイルスの多重感染による、組換えタンパク質の糖鎖改変については、これまでの研究において、カイコ個体および培養細胞においてバキュロウイルスの重感染排除が観察されたため、その原因因子を探索するためにBmNPVのノックアウトウイルスライブラリ(Ono et al., 2012)を用いてスクリーニングを行った。その結果、９つの遺伝子が原因因子候補として考えられた。今年度は、複数因子のノックアウト株を作成し、単独因子をノックアウトしたものに比べ重感染排除がさらに軽減される可能性が確認された。③大カイコ細胞内の分泌・修飾機構の解明については、小胞体・ゴルジ関連および糖鎖修飾関連のカイコホモログ289遺伝子に関して、当研究室で開発した RNAi が誘導可能なカイコ培養細胞を用いた RNAi スクリーニングによって、組換え糖タンパク質の分泌量・糖鎖構造の変化が認められた８つの候補遺伝子が選抜された。今年度は、８つの候補遺伝子について過剰発現細胞を作製し、組換えタンパク質の分泌や糖鎖修飾の影響を確認したところ、いくつかの因子の過剰発現細胞株において、組換え糖タンパク質の分泌量の増大が確認された。そして、この効果について、小胞体関連因子の発現解析を行うことで、そのメカニズムを解明できる可能性が考えられた。

3. To determine the composition, amount, hydrolysis activity and transformation of sugar transfer activity in the process of sugar lock production. The development of EndoBm (EndoBm) is an important part of the development of EndoBm. These results confirm the possibility that EndoBm may function as a specific carbohydrate lock in the endogenome. (2) Multiple infection of BmNPV was studied in vitro and in vitro, and the cause factors were explored (Ono et al., 2012) Use this to get started. The result of the test, 9 of the test results, 9 of the test results, 9 of the test results. This year, multiple factors are used to determine the likelihood of infection reduction, and single factors are used to determine the likelihood of infection reduction. 3. The study of secretion and modification mechanism in large and small cells was carried out in the laboratory. RNAi induction was possible in cultured cells. In this year, 8 candidate genes were detected in cells that had not been detected, and the effects of gene modification on secretion and glycation modification were confirmed. The analysis of the occurrence of cell related factors is based on the possibility of solving the problem.