Research for the pathogenesis of kaposiform lymphangiomatosis in PIK3CA/RAS signal pathway

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カポジ型リンパ管腫症(Kaposiform lymphangiomatosis: KLA)は全身にリンパ管組織が増殖する進行性の希少難治性疾患であるリンパ管腫症で、近年、KLAの病変部位より、血管・リンパ管新生に重要な経路である「PIK3/RASシグナル」の遺伝子変異が検出されたが、その遺伝子異常がどのようにKLAの臨床像を引き起こすかどうかは不明である。本研究課題では、これらのシグナル伝達経路に着目し、KLAの病態を解明し、その経路に対する分子標的薬の治療効果を検証する。今回、KRAS（Q61R）遺伝子変異のcDNAをプラスミドに挿入し、そのプラスミドをNucleofectorを用いて、ヒトリンパ管内皮細胞に遺伝子導入して、KRAS Q61R変異を発現させたリンパ管内皮細胞を作成した。これらの細胞において、MTT assayによる細胞増殖能、Real-time PCRやウエスタンブロットによるRAS/MAPK経路に関係する遺伝子発現や蛋白発現（RAS, MEK, ERKなど）、Pit formation assayによる骨吸収能、RAS/MAPK経路を標的とした阻害剤による効果などを測定し、細胞生物学的、分子生物学的に解析した。本結果については論文作成し、現在投稿中である。また、KRAS Q61R変異をリンパ管内皮細胞に発現させたトランスジェニックマウスを作製するため、CAGプロモーター下にLoxP―STOP―LoxP（LSL）を介して KRAS（Q61R）cDNAと、この変異をもつ細胞を追跡できるGFP cDNAを配置した遺伝子断片を生殖細胞に導入したマウスを作製した（LSL-KRAS Q61R-GFPマウス）。現在、本マウスを用い、解析中である。