Optimization for Zika virus oral mucosal vaccine using recombinant saccharomyces and lactobacilli

使用重组酵母菌和乳酸杆菌优化寨卡病毒口腔粘膜疫苗

• 批准号: 22K10495
• 负责人: 正木 秀幸
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kindai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2026-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K10495/
• 关键词: ジカウイルス; 粘膜ワクチン; コレラトキシンB; 乳酸菌; 酵母菌

フラビウイルス属のヒト感染性ウイルスであるジカウイルス(ZIKV)は、性感染症の側面や催奇形性など他のフラビウイルス属とは異なる特性を持ち、流行地域に小頭症児の出生が多発するもワクチンは未開発である。コールドチェーン不要など発展途上国でのワクチン接種に有利、かつ生殖器などの粘膜に強い免疫を誘導する粘膜ワクチンの特質に着目して、経口粘膜ワクチン抗原として用いる目的で強力かつ安全性の高い粘膜アジュバントであるコレラトキシンB(CTB)と防御誘導性蛋白質であるZIKVのエンベロープ（E）蛋白質を菌体表面に共発現する乳酸菌及び酵母菌を樹立し実験動物に投与して、より有効な防御粘膜免疫が得られるか検討する。以上の目的のため、（１）CTB発現系の作成、（２）ZIKVE蛋白質菌体表面発現乳酸菌株の樹立、および（３）先に樹立したZIKVE蛋白質菌体表面発現酵母菌株の発現至適条件の検討を行った。（１）については、CTB人工遺伝子を大腸菌用発現ベクターpGEX-6P-2にIn-fusion法を用いて組み込み、グルタチオンSトランスフェラーゼ(GST)－CTB融合蛋白として発現させるコンストラクトを作成し大腸菌を形質転換後、IPTG添加培養によりGST－CTB融合蛋白質が発現誘導されることを確認した。（２）については、ZIKVE蛋白質遺伝子をIn-fusion法を用いて乳酸菌菌体表面発現ベクターpSGANC332に組込んで発現コンストラクトpSGANC332_ZIKVEを構築、電気穿孔法により乳酸菌にtransfectして、菌体表面ZIKVE蛋白質発現乳酸菌株を樹立した。同菌株を加熱処理により死菌化した後にマウスに経口免疫したところ、血清中にZIKVE特異的IgGが誘導されることを確認した。（３）については、ガラクトース添加によるZIKVE蛋白質発現誘導についての最適条件の検討を行った。

フ ラ ビ ウ イ ル ス is の ヒ ト infectious ウ イ ル ス で あ る ジ カ ウ イ ル ス (ZIKV) は, sexual adapting just-in-time inventory の や side reminders, morphic な ど he の フ ラ ビ ウ イ ル ス genus と は different な る features を hold ち, popular regional に capitulum disease where born の が more 発 す る も ワ ク チ ン は not open 発 で あ る. コ ー ル ド チ ェ ー ン don't な ど 発 show on the road the で の ワ ク チ ン vaccination に advantage, か つ genital な ど に strong い の mucosa immune を induced す る mucosa ワ ク チ ン に の traits with mesh し て, 経 mouth mucosa ワ ク チ ン antigen と し て in い る purpose で powerful か つ security の high い mucosa ア ジ ュ バ ン ト で あ る コ レ ラ ト キ シ ン B (CTB) と defense Induced protein で あ る ZIKV の エ ン ベ ロ ー プ を bacteria (E) protein surface に altogether 発 す る lactic acid bacteria and yeast び を set し be 験 animal に cast and し て, よ り have sharper な mucosal immune defense が have ら れ る か beg す 検 る. The above-mentioned objective is to ため, (1) the occurrence of CTB is caused by ため, (2) the establishment of lactic acid bacteria strains on the surface of ZIKVE protein-producing bacteria, および (3) first に establish <s:1> the occurrence of yeast strains on the surface of ZIKVE protein-producing bacteria to the suitable conditions, 検 discuss を and った. (1) に つ い て は, CTB artificial but 伝 を coliform by 発 ベ ク タ ー pGEX - 6 p - 2 に を fusion method used In い て group み 込 み, グ ル タ チ オ ン S ト ラ ン ス フ ェ ラ ー ゼ (GST) - CTB fusion proteins と し て 発 now さ せ る コ ン ス ト ラ ク ト を made し coliform を character, IPTG add after planning to change Culturing によ によ GST-CTB fusion protein が inducing される とを とを confirming <s:1> た. (2) に つ い て は, ZIKVE を survived 伝 protein sequence In を fusion method using い て lactobacillus bacteria surface 発 ベ ク タ ー pSGANC332 に group 込 ん で 発 now コ ン ス ト ラ ク ト pSGANC332_ZIKVE を constructing method, electric 気 perforation に よ り lactobacillus に transfect し て ZI, bacteria surface KVE protein-induced lactic acid bacteria strain を establishment of た. With strain を heating 処 Richard に よ り dead bacteria change し た after に マ ウ ス に 経 mouth immune し た と こ ろ, serum に ZIKVE specific IgG が induced さ れ る こ と を confirm し た. (3) に つ い て は, ガ ラ ク ト ー ス add に よ る ZIKVE protein induced に 発 now つ い て の optimal condition の 検 line for を っ た.