脳に常在する境界性マクロファージの役割解明とALS治療を目指した実験的介入研究

旨在阐明大脑中边缘巨噬细胞的作用并治疗 ALS 的实验干预研究

• 批准号: 22K06634
• 负责人: 三澤 日出巳
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06634/
• 关键词: 筋萎縮性側索硬化症; マクロファージ; 血液脳関門

ALS病態進行に伴う脳血管周囲マクロファージ (PVM) の量的変化を評価するため、各病期のALSモデルマウス (SOD1G93Aマウス) の脊髄切片においてマクロファージマーカーCD206及び血管マーカーCD31での蛍光二重免疫染色を行い細胞数を定量した。その結果、病態進行に伴うPVMの有意な増加が認められた。次に、PVMの質的変化を評価するため、しばしばマクロファージの活性化マーカーとして用いられるMHC class Ⅱ（MHC Ⅱ）分子に着目し、マクロファージマーカーCD163と血管マーカーCD31との蛍光三重染色を行った。その結果、ALS病態後期においてPVMのうちMHC Ⅱ (+) の割合が増加する傾向が見られた。SOD1G93AマウスにおいてPVMの量的・質的変化が見られたことから、次にPVMへの実験的介入による病態進行への影響を評価した。ALS発症前のSOD1G93Aマウスに、PVMを選択的に枯渇できる薬剤として知られているクロドロン酸リポソームを投与し、PVMが枯渇した際のALS病態を解析した。まず、クロドロン酸リポソームを大槽（脳脊髄液）内に投与し、ミクログリアには影響を及ぼさずPVMを選択的に枯渇できることを確認した。次にSOD1G93Aマウスへの投与を検討したが、PVMは枯渇後1週間程度で再びリカバー・定着することが知られていたため、複数回投与によりPVMを持続的に枯渇する系を新たに確立した。発症前（80日齢）のSOD1G93Aマウスにクロドロン酸リポソームまたはコントロールリポソームを週に1度、トータル6回大槽内投与し、神経学的スコアと生存期間を指標にALS病態を比較した。その結果、クロドロン酸群のスコア2（中程度の症状）に達するまでの期間及び生存期間はコントロール群より約１週間延長し、PVMの枯渇により病態が改善する傾向が見られた。

The pathological state of ALS was measured by double immunostaining with ALS and CD31 double immunostaining (double immunostaining). The pathological state of the disease was accompanied with the amount of peripheral blood vessels (PVM), the number of cells was quantified by double immunostaining, and the number of cells was quantified by double immunostaining. The results and symptoms of the disease were associated with the intention of PVM to increase the symptoms. In the second phase, the chemical reaction of PVM was detected, and the activation of MHC class Ⅱ (MHC Ⅱ) molecules was observed. The target was fixed on the blood vessels of CD163 blood vessels using the molecule of MHC Ⅱ. The results showed that in the later stage of ALS disease, PVM infection caused by MHC Ⅱ (+) was cut off and added to the disease. The effect of SOD1G93A on the volume of PVM was significantly higher than that in patients with secondary PVM infection. The disease progressed significantly in patients with secondary PVM infection. Before the ALS disease, the withered cells selected by the PVM and the PVM were selected for the diagnosis of ALS disease. The drop in the tank (spinal fluid), the drop in the tank, the drop in the shadow, and the confirmation in the selection of the PVM. The second time the SOD1G93A has been dropped and the number of the PVM has been changed. After the PVM has dried up, you will know that you are aware of the number of errors, and the number of returns has been registered. Before the disease (80 days), SOD1G93A patients suffered from severe acidity. The symptoms were similar to those of the patients with ALS disease. The results showed that the number of mice with moderate symptoms (moderate symptoms) was increased by about 1 mile during the period of survival and the period of survival, and the state of PVM was improved.