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電位依存性プロトンチャネルHv1/VSOPによる酸化ストレス抑制機能の解明

阐明电压门控质子通道 Hv1/VSOP 的氧化应激抑制功能

基本信息

批准号：
22K06829
负责人：
大河内善史
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06829/
关键词：
プロトンチャネル NADPHオキシダーゼ酸化ストレス pH 膜電位

项目摘要

本実験では、Hv1/VSOPによる抗酸化ストレス作用を明らかにするために、活性酸素を作る酵素であるNADPHオキシダーゼによる酸化ストレス作用に着目して実験を行った。初年度はHv1/VSOPによるNADPHオキシダーゼを制御する機構に着目して実験を行った。具体的には、Hv1/VSOPがNADPHオキシダーゼの数の制御に関わる可能性を検証するためにビオチン化法により細胞膜上に発現するNADPHオキシダーゼの定量を試みた。まず、好中球走化性因子であるfMLFで好中球を刺激すると細胞膜にNADPHオキシダーゼがリクルートされることを利用して、マウス骨髄から単離した好中球をfMLF刺激した後、ビオチン化法により細胞膜上に局在するNADPHオキシダーゼを回収した。刺激していない好中球に対してもビオチン化法により細胞膜上のNADPHオキシダーゼを回収し、NADPHオキシダーゼの抗体を用いたウェスタンブロット法で発現を調べた。その結果、fMFL刺激された好中球においてNADPHオキシダーゼのバンドが検出された。ビオチンのみではNADPHオキシダーゼは検出されなかった。一方で、刺激していない好中球においてはNADPHオキシダーゼのバンドは検出されたものの非常に低レベルの発現であることが示唆された。すなわち、ビオチン化法により細胞膜上のNADPHオキシダーゼを検出することができること、そして局在レベルを定量化できることが分かった。

The effects of anti-acidizing agent, Hv1/VSOP, anti-acidizing agent, active acid, enzyme, NADPH, acid, anti-acidizing, anti-acidi At the beginning of the year, the Hv1/VSOP management organization is responsible for the operation of the NADPH operation system. The specific information, Hv1/VSOP, NADPH, the number of factors, the possibility, the possibility, the possibility. The walking factor of the ball, the walking factor of the ball, the fMLF, the stimuli, the membrane, the membrane, the membrane To stimulate the ball in the middle of the ball, the NADPH was detected in the cell membrane, the antibody was detected in the cell membrane, the antibody was detected in the cell membrane, and the antibody was detected in the membrane. The results show that fMFL stimulates the ball, NADPH the ball, the ball and the ball. I don't know what to do. I don't know. I don't know. One side, stimulate the ball, NADPH the ball, make the ball look very low, show that the ball is instigated. In this paper, we use the chemical method to determine the concentration of NADPH on the cell membrane, and to quantify the data.