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Study of enterococcal novel highly-conjugative plasmids

肠球菌新型高接合质粒的研究

基本信息

批准号：
22K07067
负责人：
富田治芳
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

① pMG1型プラスミドの解析今年度はpMG1型高頻度伝達性プラスミドpHTβの高頻度接合伝達の調節因子について解析を進め、以下の成果を得た。以前に同定した接合凝集領域の転写を正に調整する因子であるtraB遺伝子の変異体の作成、分離を行った。接合凝集遺伝子内にプロモーターレスLacZ遺伝子が転写方向に挿入されたpMG1型プラスミドpHTβ::lacZにtraBの欠失変異を導入したtraB変異プラスミドを構築した。腸球菌宿主内においてlacZの転写活性は減弱したが、クローン化したtraBプラスミドの導入によって活性は完全に相補された。変異誘導性大腸菌宿主でtraBプラスミドに変異を導入し、腸球菌内でlacZの転写活性を相補できない変異プラスミドを得た。この変異プラスミドからtraBを再クローン化し、traBの機能を失った変異体を複数得た。現在、変異体について変異部位の解析を行っている。またRNA-Seq解析によってpHTβの網羅的な転写解析を行い、転写ユニットを同定した。一方、VanD型耐性遺伝子をコードするpMG1型プラスミドpEF-Dの解析として、実験室内においてpEF-Dが野生型宿主E. faeciumからE. faecalisへ接合伝達可能であること、またバンコマイシン耐性の発現自体は極めて不安定で維持されないことを明らかにした。今年度はこれらの成果を論文報告した。② pELF1型線状プラスミドの解析今年度はpELF1型線状プラスミドの複製と伝達に関する遺伝子領域を同定し、分子遺伝学的解析を行うために、E. faeciumを用いた効率的な変異導入システムの構築を行った。また分子遺伝学的な解析および各種解析ツールの構築を行うための適切な宿主E. faecium株を選択することを目的として、宿主候補となる複数の臨床分離E. faecium株の全ゲノム配列を決定した。

(1) pMG1-type protein analysis: This year, pMG1-type high frequency protein analysis: pHT β-type high frequency protein analysis: pHTβ-type high frequency protein analysis: pMG1-type high frequency protein analysis: pHTβ-type high frequency protein analysis: pMG1-type high frequency protein analysis: pHTβ-type high frequency protein analysis: pMG1-type high frequency protein analysis: pHTβ-type high frequency protein analysis: pMG1-type high frequency protein analysis: pHT β-type high frequency protein analysis: In the past, the composition of the same binding domain was adjusted by the factor of the formation and separation of the traB gene. Conjugate agglutinates the gene in the gene to write the direction to insert pMG1 type gene to pHTβ::lacZ type gene to insert traB gene to construct. The activity of lacZ in enterococcus hosts was reduced, and the activity of lacZ in enterococcus hosts was completely supplemented. The expression of lacZ in E. coli is complementary to that in E. coli. The difference between traB and traB is that traB functions are different. Now, the different parts of the analysis of different parts of the analysis. RNA-Seq analysis is used to analyze the content of pHTβ. pMG1-type resistant vector pEF-D was isolated from wild type host E. faeciumからE. Faecalis is a combination of natural and natural resources. This year's annual report on the results of the (2) pELF1 linear model analysis of this year's pELF1 linear model analysis of replication and development of related genetic sub-domain identification, molecular genetic analysis of the process, E. Faecium is used in different ways. Molecular genetics analysis and construction of molecular genetics. Faecium strains are selected from a variety of clinical isolates. The faecium plants are completely compatible.