Study of enterococcal novel highly-conjugative plasmids

肠球菌新型高接合质粒的研究

• 批准号: 22K07067
• 负责人: 富田 治芳
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07067/
• 关键词: バンコマイシン耐性腸球菌; 多剤耐性菌; 高頻度接合伝達性プラスミド; pMG1型プラスミド; pELF1型プラスミド; バンコマイシン耐性腸球菌（VRE）; 高頻度伝達性プラスミド; 線状プラスミド

① pMG1型プラスミドの解析今年度はpMG1型高頻度伝達性プラスミドpHTβの高頻度接合伝達の調節因子について解析を進め、以下の成果を得た。以前に同定した接合凝集領域の転写を正に調整する因子であるtraB遺伝子の変異体の作成、分離を行った。接合凝集遺伝子内にプロモーターレスLacZ遺伝子が転写方向に挿入されたpMG1型プラスミドpHTβ::lacZにtraBの欠失変異を導入したtraB変異プラスミドを構築した。腸球菌宿主内においてlacZの転写活性は減弱したが、クローン化したtraBプラスミドの導入によって活性は完全に相補された。変異誘導性大腸菌宿主でtraBプラスミドに変異を導入し、腸球菌内でlacZの転写活性を相補できない変異プラスミドを得た。この変異プラスミドからtraBを再クローン化し、traBの機能を失った変異体を複数得た。現在、変異体について変異部位の解析を行っている。またRNA-Seq解析によってpHTβの網羅的な転写解析を行い、転写ユニットを同定した。一方、VanD型耐性遺伝子をコードするpMG1型プラスミドpEF-Dの解析として、実験室内においてpEF-Dが野生型宿主E. faeciumからE. faecalisへ接合伝達可能であること、またバンコマイシン耐性の発現自体は極めて不安定で維持されないことを明らかにした。今年度はこれらの成果を論文報告した。② pELF1型線状プラスミドの解析今年度はpELF1型線状プラスミドの複製と伝達に関する遺伝子領域を同定し、分子遺伝学的解析を行うために、E. faeciumを用いた効率的な変異導入システムの構築を行った。また分子遺伝学的な解析および各種解析ツールの構築を行うための適切な宿主E. faecium株を選択することを目的として、宿主候補となる複数の臨床分離E. faecium株の全ゲノム配列を決定した。

(1) type pMG1 プ ラ ス ミ ド の parsing our は pMG1 type high frequency 伝 sex プ ラ ス ミ ド pHT beta の high frequency jointing 伝 の adjustment factor に つ い て parsing を into め, the following の を た. に before be し た joint agglutination field の is planning to write を に adjustment す る factor で あ る traB heritage 伝 の son - variants, separation line を っ の た. Joint agglutination heritage 伝 child within に プ ロ モ ー タ ー レ ス LacZ heritage 伝 son が planning write direction に scions into さ れ た pMG1 type プ ラ ス ミ ド pHT beta: : LacZ に traB の owe - vision loss を import し た traB - different プ ラ ス ミ ド を build し た. Enterococcus within the host に お い て lacZ の planning write activity weakened は し た が, ク ロ ー ン change し た traB プ ラ ス ミ ド の import に よ っ て activity was completely fill に phase さ は れ た. - different induced coliform host で traB プ ラ ス ミ ド に - different を import し, enterococcus で lacZ の planning write activity を phase fill で き な い - different プ ラ ス ミ ド を た. こ の - different プ ラ ス ミ ド か ら traB を again ク ロ ー ン し, traB の function を lost っ た - variant た を plural. Now, the variant に に に て て て of the variant part <s:1> analysis を line って る る る. Youdaoplaceholder0 RNA-Seq analysis によってpHTβ snaget な転 writing analysis を lines た and 転 writing ユニットを, the same as た. One party, type VanD patience but 伝 を コ ー ド す る pMG1 type プ ラ ス ミ ド pEF -d の parsing と し て, be 験 indoor に お い て pEF - D が wild-type hosts e. faecium か ら E. Faecalis へ joint 伝 may で あ る こ と, ま た バ ン コ マ イ シ ン patience の 発 autologous は now extremely め て unrest で maintain さ れ な い こ と を Ming ら か に し た. This year 's れら れら を achievements を paper report た た. (2) type pELF1 linear プ ラ ス ミ ド の parsing our は pELF1 type linear プ ラ ス ミ ド の copy と 伝 da に masato す る heritage 伝 sub-fields を with し, molecular line but 伝 learn analytical を う た め に, e. faecium を with い た な sharper rates - different import シ ス テ ム の line build を っ た. ま た molecular but 伝 learn な お よ び various analytical ツ ー ル の line build を う た め の appropriate な host e. faecium strains を sentaku す る こ と を purpose と し て, alternate host と な る plural の clinical separation e. faecium strains の full ゲ ノ ム match column を decided し た.

项目成果

Advances of genetic engineering in streptococci and enterococci

• DOI: 10.1111/1348-0421.13015
• 发表时间: 2022-06
• 期刊: Microbiology and Immunology
• 影响因子: 2.6
• 作者: Jun Kurushima;H. Tomita

NanoporeSequencing, Methods and Protocols, Genomic Epidemiological Analysis of Antimicrobial-Resistant Bacteria with Nanopore Sequencing.

纳米孔测序、方法和方案、使用纳米孔测序对抗菌药物耐药细菌进行基因组流行病学分析。

• 发表时间: 2023
• 作者: Suzuki M;Hashimoto Y;Hirabayashi A;Yahara K;Yoshida M;Fukano H;Hoshino Y;Shibayama K;Tomita H.
• 通讯作者: Tomita H.