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Study of enterococcal novel highly-conjugative plasmids

肠球菌新型高接合质粒的研究

基本信息

批准号：
22K07067
负责人：
富田治芳
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

① pMG1型プラスミドの解析今年度はpMG1型高頻度伝達性プラスミドpHTβの高頻度接合伝達の調節因子について解析を進め、以下の成果を得た。以前に同定した接合凝集領域の転写を正に調整する因子であるtraB遺伝子の変異体の作成、分離を行った。接合凝集遺伝子内にプロモーターレスLacZ遺伝子が転写方向に挿入されたpMG1型プラスミドpHTβ::lacZにtraBの欠失変異を導入したtraB変異プラスミドを構築した。腸球菌宿主内においてlacZの転写活性は減弱したが、クローン化したtraBプラスミドの導入によって活性は完全に相補された。変異誘導性大腸菌宿主でtraBプラスミドに変異を導入し、腸球菌内でlacZの転写活性を相補できない変異プラスミドを得た。この変異プラスミドからtraBを再クローン化し、traBの機能を失った変異体を複数得た。現在、変異体について変異部位の解析を行っている。またRNA-Seq解析によってpHTβの網羅的な転写解析を行い、転写ユニットを同定した。一方、VanD型耐性遺伝子をコードするpMG1型プラスミドpEF-Dの解析として、実験室内においてpEF-Dが野生型宿主E. faeciumからE. faecalisへ接合伝達可能であること、またバンコマイシン耐性の発現自体は極めて不安定で維持されないことを明らかにした。今年度はこれらの成果を論文報告した。② pELF1型線状プラスミドの解析今年度はpELF1型線状プラスミドの複製と伝達に関する遺伝子領域を同定し、分子遺伝学的解析を行うために、E. faeciumを用いた効率的な変異導入システムの構築を行った。また分子遺伝学的な解析および各種解析ツールの構築を行うための適切な宿主E. faecium株を選択することを目的として、宿主候補となる複数の臨床分離E. faecium株の全ゲノム配列を決定した。

① Analysis of pMG1 type high-frequency coupling factors This year, pMG1-type high-frequency densification of pHTβ high-frequency joint densification adjustment factors was analyzed and the following results were obtained. In the past, the joint agglomeration field was combined and the original adjustment factor was created and separated. Conjugation agglutination of the remaining parts of the body LacZ にプロモーターレスLacZ 缝子が転WRITE DIRECTION にINSERT されたpMG1 type プラスミドpHTβ::lacZにtraBのowed loss変differentを ImportしたtraB変differentプラスミドをconstructedした. In the enterococcus host, the activity of lacZ in the enterococcus is weakened and the activity of lacZ in the enterococcus host is completely complemented. The heterogeneity-inducible coliform host has introduced traB into the coliform host, and the lacZ-specific activity in the enterococci has complemented the other bacteria.この変different プラスミドからtraBをzaiクローン化し, traBのfunctionをlostった変variantを plural gainた. Now, the analysis of the different parts of the different bodies is done.またRNA-Seq analysis によってpHTβのNET includes な転写analytic を行い and 転WRITING ユニットを同定した. On the one hand, VanD type resistant leftover pMG1 type プラスミドpEF-Dのanalytic として, 実験内においてpEF-Dがwild-type host E. faecium からE. faecalisへjoint伝达mayであること、またバンコマイシンThe problem of patience is that it is extremely unstable and maintains its stability. This year's academic achievement is a thesis report. ② Analysis of pELF1-type linear polyester This year's pELF1-type linear polypeptide is replicated in the field of molecular genetics, analysis of molecular genetics, and E. faeciumをuses the efficiency of the な変different import システムのconstruct を行った. Analysis of molecular genetics Various analysis of molecular genetics Construction of the appropriate host E. faecium strain selection method, host candidate selection method, host candidate selection method, clinical isolation E. Faecium strain selection method, all-in-one allocation decision method.