8分節D型インフルエンザウイルスを用いたM1・M2タンパク質の機能解析

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D型インフルエンザウイルス(IDV)は、経済損失の高いウシ呼吸器病症候群(BRDC)の原因ウイルスの一つであり、その詳細なウイルス学的性状解析が求められている。IDVは7本に分節化したゲノムを有し、その内、M分節にはM2タンパク質の前駆体タンパク質p42とスプライシングにより転写・翻訳されるM1タンパク質がコードされている。通常のM分節では、一方の遺伝子に変異を導入した場合、もう片方の遺伝子にも変異が生じてしまうため、これらのウイルスタンパク質の機能を個別に解析するための変異ウイルスの作出は困難である。そこで本研究では、申請者がこれまでに開発してきたリバースジェネティクス(RG)法を基に、①M1とM2(p42)遺伝子をそれぞれ別の分節(M1とM2分節)にもつ8分節型IDVを作出することで、②M1およびM2タンパク質の機能ドメインを明らかにすることを目的とした。当該年度は、IDVのM1遺伝子内のスプライシングドミナント配列にサイレント変異を入れることでp42遺伝子のみを発現するRG用プラスミドを構築した。またM分節のイントロン領域を欠損させることで、M1遺伝子のみを発現させるRG用プラスミドを構築した。これらのプラスミドとM分節以外の各分節発現プラスミドを用い、申請者が以前に開発したRG法により、ウイルス作出を試みたところ、M1とM2(p42)遺伝子をそれぞれ別の分節(M1とM2分節)にもつ8分節型IDVの作出に成功した。この組換え技術を基盤に、M1およびM2タンパク質の各種変異ウイルスを作出することで、それぞれのタンパク質の詳細な機能が明らかになることが期待される。次年度は、実際に本手法によりそれぞれのタンパク質の機能解析を行う。