8分節D型インフルエンザウイルスを用いたM1・M2タンパク質の機能解析

使用 8 段 D 型流感病毒对 M1 和 M2 蛋白进行功能分析

• 批准号: 22K20619
• 负责人: 石田 大歩
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Azabu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-08-31 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K20619/
• 关键词: D型インフルエンザウイルス; リバースジェネティクス; M分節; 8分節型D型インフルエンザウイルス; M1; M2; P42; スプライシング; オルソミクソウイルス

D型インフルエンザウイルス(IDV)は、経済損失の高いウシ呼吸器病症候群(BRDC)の原因ウイルスの一つであり、その詳細なウイルス学的性状解析が求められている。IDVは7本に分節化したゲノムを有し、その内、M分節にはM2タンパク質の前駆体タンパク質p42とスプライシングにより転写・翻訳されるM1タンパク質がコードされている。通常のM分節では、一方の遺伝子に変異を導入した場合、もう片方の遺伝子にも変異が生じてしまうため、これらのウイルスタンパク質の機能を個別に解析するための変異ウイルスの作出は困難である。そこで本研究では、申請者がこれまでに開発してきたリバースジェネティクス(RG)法を基に、①M1とM2(p42)遺伝子をそれぞれ別の分節(M1とM2分節)にもつ8分節型IDVを作出することで、②M1およびM2タンパク質の機能ドメインを明らかにすることを目的とした。当該年度は、IDVのM1遺伝子内のスプライシングドミナント配列にサイレント変異を入れることでp42遺伝子のみを発現するRG用プラスミドを構築した。またM分節のイントロン領域を欠損させることで、M1遺伝子のみを発現させるRG用プラスミドを構築した。これらのプラスミドとM分節以外の各分節発現プラスミドを用い、申請者が以前に開発したRG法により、ウイルス作出を試みたところ、M1とM2(p42)遺伝子をそれぞれ別の分節(M1とM2分節)にもつ8分節型IDVの作出に成功した。この組換え技術を基盤に、M1およびM2タンパク質の各種変異ウイルスを作出することで、それぞれのタンパク質の詳細な機能が明らかになることが期待される。次年度は、実際に本手法によりそれぞれのタンパク質の機能解析を行う。

流感病毒（IDV）是牛呼吸综合征（BRDC）的病毒之一，该病毒具有很高的经济损失，需要对其性质进行详细的病毒学分析。 IDV的基因组已分为7个，M段编码M2蛋白前体蛋白p42和通过剪接转录和翻译的M1蛋白。在正常的m段中，如果将突变引入一个基因，则在另一个基因中会发生突变，因此很难创建突变的病毒来分析这些病毒蛋白的功能。因此，这项研究旨在通过1）使用申请人开发的反向遗传学（RG）方法来阐明M1和M2蛋白的功能域，1）创建一个8节IDV，其中M1和M2（P42）基因将分为单独的段（M1和M2段）（M1和M2段），以及2次和2），以澄清函数式和M1和M1和M1和M1和M1和M1和M1。在今年，我们构建了一种用于RG的质粒，该质粒仅通过将无声突变插入IDV的M1基因中的剪接显性序列中来表达P42基因。此外，通过删除M段的内含子区域，RG的质粒仅构建仅表示M1基因。使用这些质粒和每个片段表达质粒以外的每个段表达质粒，申请人试图使用申请人先前开发的RG方法生成病毒，并成功地创建了与M1和M2（p42）基因的8段IDV（M1和M2 segments）。基于这种重组技术，可以预期，通过产生M1和M2蛋白的各种突变病毒，将揭示每种蛋白质的详细功能。在第二年，将使用此方法对每种蛋白质进行功能分析。