8分節D型インフルエンザウイルスを用いたM1・M2タンパク質の機能解析

使用 8 段 D 型流感病毒对 M1 和 M2 蛋白进行功能分析

• 批准号: 22K20619
• 负责人: 石田 大歩
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Azabu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-08-31 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K20619/
• 关键词: D型インフルエンザウイルス; リバースジェネティクス; M分節; 8分節型D型インフルエンザウイルス; M1; M2; P42; スプライシング; オルソミクソウイルス

D型インフルエンザウイルス(IDV)は、経済損失の高いウシ呼吸器病症候群(BRDC)の原因ウイルスの一つであり、その詳細なウイルス学的性状解析が求められている。IDVは7本に分節化したゲノムを有し、その内、M分節にはM2タンパク質の前駆体タンパク質p42とスプライシングにより転写・翻訳されるM1タンパク質がコードされている。通常のM分節では、一方の遺伝子に変異を導入した場合、もう片方の遺伝子にも変異が生じてしまうため、これらのウイルスタンパク質の機能を個別に解析するための変異ウイルスの作出は困難である。そこで本研究では、申請者がこれまでに開発してきたリバースジェネティクス(RG)法を基に、①M1とM2(p42)遺伝子をそれぞれ別の分節(M1とM2分節)にもつ8分節型IDVを作出することで、②M1およびM2タンパク質の機能ドメインを明らかにすることを目的とした。当該年度は、IDVのM1遺伝子内のスプライシングドミナント配列にサイレント変異を入れることでp42遺伝子のみを発現するRG用プラスミドを構築した。またM分節のイントロン領域を欠損させることで、M1遺伝子のみを発現させるRG用プラスミドを構築した。これらのプラスミドとM分節以外の各分節発現プラスミドを用い、申請者が以前に開発したRG法により、ウイルス作出を試みたところ、M1とM2(p42)遺伝子をそれぞれ別の分節(M1とM2分節)にもつ8分節型IDVの作出に成功した。この組換え技術を基盤に、M1およびM2タンパク質の各種変異ウイルスを作出することで、それぞれのタンパク質の詳細な機能が明らかになることが期待される。次年度は、実際に本手法によりそれぞれのタンパク質の機能解析を行う。

Type D イ ン フ ル エ ン ザ ウ イ ル ス (IDV) は, 経 済 high loss の い ウ シ respirator disease syndrome (BRDC) の reason ウ イ ル ス の a つ で あ り, そ の detailed な ウ イ ル ス learn the character of analytic が o め ら れ て い る. IDV は 7 this に stanza し た ゲ ノ ム を し, そ の inside, M section に は M2 タ ン パ ク 駆 body before mass の タ ン パ ク qualitative p42 と ス プ ラ イ シ ン グ に よ り planning to write, double 訳 さ れ る M1 タ ン パ ク qualitative が コ ー ド さ れ て い る. Usually の M section で は, one party の but 伝 に - different を import し た occasions, も う piece side の heritage 伝 son に も - born different が じ て し ま う た め, こ れ ら の ウ イ ル ス タ ン パ ク qualitative の function を individual に parsing す る た め の - different ウ イ ル ス の make は difficult で あ る. そ こ で this study で は, applicants が こ れ ま で に open 発 し て き た リ バ ー ス ジ ェ ネ テ ィ ク ス method (RG) を に, (1) と M1 M2 (p42) posthumous son 伝 を そ れ ぞ れ don't の section (M1 と M2) に も つ eight segmental type IDV を make す る こ と で, (2) the M1 お よ び M2 タ ン パ ク qualitative の function ド メ イ ン を Ming ら か に Youdaoplaceholder0 た とを purpose と た た. When the annual は, IDV の M1 heritage 伝 child within の ス プ ラ イ シ ン グ ド ミ ナ ン ト match column に サ イ レ ン ト - different を into れ る こ と で p42 posthumous son 伝 の み を 発 now す る RG with プ ラ ス ミ ド を build し た. ま た M section の イ ン ト ロ を owe ン field loss さ せ る こ と で, M1 but 伝 の み を 発 now さ せ る RG with プ ラ ス ミ ド を build し た. こ れ ら の プ ラ ス ミ ド と M section outside の each section 発 now プ ラ ス ミ ド を い, applicants が に before open 発 し た RG method に よ り, ウ イ ル ス try make を み た と こ ろ, と M1, M2 (p42) posthumous son 伝 を そ れ ぞ れ don't の section (M1 と M2) に も つ eight segmental type IDV の make に successful し た. こ の group in え technology を base plate に, M1 お よ び M2 タ ン パ ク qualitative の various - different ウ イ ル ス を make す る こ と で, そ れ ぞ れ の タ ン パ ク qualitative の detailed な function が Ming ら か に な る こ と が expect さ れ る. In the following year, に, in practice, に. Analysis of the quality and function of this technique によ によ それぞれ タ タ <e:1> パ パ を.