Elucidation of the pathogenesis of wild-type ATTR amyloidosis, especially focusing on autoimmune mechanism

同意の得られた健常人12名、ATTRwtアミロイドーシス患者35名、非ATTRwtアミロイドーシス患者68名から血清サンプルを得た。血清中のTTRに対する自己抗体の存在を確認するために、リコンビナントTTRをSDS-PAGEし、PVDFメンブレンに転写して血清を一次抗体としてウェスタンブロットを行なった。全長TTRではTTR monomerに相当する約14 kD付近に明らかなバンドが出現し、dimerやtrimerに相当する高位にも淡いバンドが出現した。これはTTRタンパクは本来安定的な4量体構造をとるが、それが崩れると自己の免疫機構によって異物として認識され、自己抗体が作られることを支持するものである。Shorty TTR（TTRペプチド49-127）のウェスタンブロットではmonomerに相当する約9 kDに加え，20-80 kDの範囲に複数のバンドが出現した。このバンドはshorty TTRのoligomerに対する自己抗体と考えられ、ほとんどの血清サンプルで80 kD付近に共通のバンドが出現するが、サンプルによって高位・数が異なる複数のバンドが出現した。これは体内に多様なshorty TTR oligomerが存在し、これを排除しようとするヒトの免疫機構があることを示している。ATTRwt患者群と非患者群で出現するバンドに特徴的な傾向は見出せなかった。次に、TTRに対する自己抗体を定量的に評価するために、ELISAによる抗体価の評価系構築を試みた。間接ELISAを採用し、TTRタンパクを固相化し、血清、続けて標識ヒトIgG二次抗体を反応させ、TMB基質で発色させた。反応条件を複数検討したところ、wild TTR、shorty TTRとも有意差を持って年齢に比例して抗体価が上昇していく傾向が確認されたが、ATTRwt患者群と非患者群では有意差を認めなかった。

同意の得られた健常人12名、ATTRwtアミロイドーシス患者35名、非ATTRwtアミロイドーシス患者68名から血清サンプルを得た。血清中のTTRに対する自己抗体の存在を確認するために、リコンビナントTTRをSDS-PAGEし、PVDFメンブレンに転写して血清を一次抗体としてウェスタンブロットを行なった。全長TTRではTTR monomerに相当する約14 kD付近に明らかなバンドが出現し、dimerやtrimerに相当する高位にも淡いバンドが出現した。これはTTRタンパクは本来安定的な4量体構造をとるが、それが崩れると自己の免疫機構によって異物として認識され、自己抗体が作られることを支持するものである。Shorty TTR（TTRペプチド49-127）のウェスタンブロットではmonomerに相当する約9 kDに加え，20-80 kDの範囲に複数のバンドが出現した。このバンドはshorty TTRのoligomerに対する自己抗体と考えられ、ほとんどの血清サンプルで80 kD付近に共通のバンドが出現するが、サンプルによって高位・数が異なる複数のバンドが出現した。これは体内に多様なshorty TTR oligomerが存在し、これを排除しようとするヒトの免疫機構があることを示している。ATTRwt患者群と非患者群で出現するバンドに特徴的な傾向は見出せなかった。次に、TTRに対する自己抗体を定量的に評価するために、ELISAによる抗体価の評価系構築を試みた。間接ELISAを採用し、TTRタンパクを固相化し、血清、続けて標識ヒトIgG二次抗体を反応させ、TMB基質で発色させた。反応条件を複数検討したところ、wild TTR、shorty TTRとも有意差を持って年齢に比例して抗体価が上昇していく傾向が確認されたが、ATTRwt患者群と非患者群では有意差を認めなかった。