食用植物への遺伝子組込みによるヒトワクチンの開発

通过基因整合到可食用植物中开发人类疫苗

• 批准号: 09877144
• 负责人: 牛島 廣治
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877144/
• 关键词: 食用植物; HIV; ワクチン; gp120; レタス; 組込み; 組換え体; アグロバクテリウム; ロタウイルス; 下痢症ウイルス

本研究は、治療的ワクチンを含めたワクチンを植物を利用することで開発しようというものである。ワクチンの投与法については経口、経鼻法といった簡便性、日常性をもった方法の検討も研究の目的とする。平成10年までに既に次のことが可能となった。(1)組み込む遺伝子領域とウイルス株の選定:HIVのエンベロープ(gp120)にはエピトープとなる部位が複数あり、抗原性の高い領域である。このgp120遺伝子を組み込む領域とした。マクロファージ親和性ウイルスの1つの株であるBAL株を選んだ。(2)遺伝子の増幅:プライマーの存謹下でPCRをし、目的遺伝子を増幅した。(3)ベクターへの挿入:目的遺伝子をpUC12-35S-NOSプラスミドBamHI切断部位に挿入した(35SプロモーターとNOSターミネーター間に挿入次に、EcoRI、HindIIIで切断し植物細菌アグロバクテリウムのベクターBin19のT-DNA領域に挿入した。(4)細菌への導入と植物への導入:アグロバクテリウム ツメファンテス細菌は自然界では、根頭癌腫病を引き起こし、独特の共存関係を営む。この現象は、アグロバクテリウムが植物に感染するとベクターBin19のT-DNA領域が植物のゲノムに移入されることによるものである。遺伝子を挿入したベクターBin19をアグロバクテリウムに導入した後、アグロバクテリウムを植物に感染させると、先の原理により目的遺伝子は植物のゲノムに移入された。(5)植物の分化・生育:今回は食用植物としてのレタスにHIVエンベロープ(gp120)遺伝子を導入し、カルスから分化させ形質転換植物を得た。(6)レタスの蛋白を葉から抽出し、ELISA法、ウエスタンブロット法でその発現を調べた。HIV抗体陽性血清と反応する蛋白の分画を認めた。このような粘膜免疫システムを応用したワクチン法は、HIVの感染者が増加している国内はもとより、感染が拡がり続けている開発途上国においても重要な戦略になりえるものと考える。

This study は, treatment of ワ ク チ ン を containing め た ワ ク チ ン を を plants use す る こ と で open 発 し よ う と い う も の で あ る. ワ ク チ ン の cast and law に つ い て は 経 method, 経 snout と い っ た simplicity, daily を も っ た method の 検 for purpose の も study と す る. In the 10th year of Heisei, までに was に times <s:1> とが とが possibly となった. (group 1) み 込 む heritage 伝 sub-fields と ウ イ ル ス の strains selected: HIV の エ ン ベ ロ ー プ (gp120) に は エ ピ ト ー プ と な る parts が plural あ り, antigenicity の high い field で あ る. The 伝 <s:1> gp120 remains in the 伝 subgroup を of the み込む field と た た. Youdaoplaceholder2 ロファ ロファ ジ ジ affinity ウ ウ ス ス <s:1> 1 ジ ス strain であるBAL strain を select んだ. (2) The increase in the 伝 sub-<s:1> :プラ プラ <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> and the increase in the を sub-を of the objective 伝 sub-た. (3) ベ ク タ ー へ の scions into: objective heritage 伝 son を pUC12-35 s - NOS プ ラ ス ミ ド BamHI cut parts に scions into し た (35 s プ ロ モ ー タ ー と NOS タ ー ミ ネ ー タ ー に between scions into に, EcoRI, HindIII で cut し plant bacteria ア グ ロ バ ク テ リ ウ ム の ベ ク タ ー Bin19 の T -DNA field に insert た. (4) bacteria へ の import と plant へ の import: ア グ ロ バ ク テ リ ウ ム ツ メ フ ァ ン テ ス bacteria は nature で は, root head cancer disease を lead き こ し, unique の coexistence masato を 営 む. こ の は, ア グ ロ バ ク テ リ ウ ム が plant に infection す る と ベ ク タ ー Bin19 の が T - DNA field plant の ゲ ノ ム に move さ れ る こ と に よ る も の で あ る. Posthumous son 伝 を scions into し た ベ ク タ ー Bin19 を ア グ ロ バ ク テ リ ウ ム に import し た, ア グ ロ バ ク テ リ ウ ム を plant に infection さ せ る と principle, first の に よ り purpose heritage 伝 son は plant の ゲ ノ ム に move さ れ た. (5) plant の differentiation birth: today back は edible plants と し て の レ タ ス に HIV エ ン ベ ロ ー プ (gp120) heritage 伝 を import し, カ ル ス か ら differentiation さ せ form quality planning in plant を た. (6)レタス <s:1> protein を leaf ら ら extraction ら, ELISA method, ウエスタ <s:1> ブロット ブロット method でそ を adjustment べた. HIV antibody-positive serum と anti応 する protein fraction を recognition めた. こ の よ う な mucosal immunity シ ス テ ム を 応 with し た ワ ク チ の ン は, HIV infection が raised plus し て い る domestic は も と よ り, infection が company が り 続 け て い る 発 way on the national に お い て も important な 戦 slightly に な り え る も の と exam え る.

项目成果

Yue Han-Jun & Ushijima H: "Detection and genetyping of ashoviruses by RT-PCR and Sequencing." J.Jap.Assoc.Infect.Dis. 70. 1220-1226 (1996)

岳汉俊

Matsui M,Ushijima H: "Detection of serotypes of astrouiruses by reverse transcription-polymerase chain reaction and bomologies of the types." Microbiol.Immunol.42. 539-547 (1998)

Matsui M，Ushijima H：“通过逆转录聚合酶链反应检测 astroiruses 血清型以及该类型的生物学。”

Wen L & Ushijima H: "Genetic variation in the VP7 gene of human rotavirus seretype3 (G3 types) isolated in CH_1na and Japan" Arch.Virol.142. 1481-1489 (1997)

文丽

Akihara S.& Ushijima H: "An outbreak of Norwalk-like virus infection in Tokyo and Saitama in late 1995" J.Jap.Assoc.Infect.Dis.70. 840-841 (1996)

秋原 S.

Yagyu F,Ushijima H: "Cell tropisms,subtrpe,nucleotide diversity and drug resistance in saliva and blood of HIV-1." AIDS Research News letter. 11. 35-35 (1997)

Yagyu F，Ushijima H：“HIV-1唾液和血液中的细胞趋向性、亚型、核苷酸多样性和耐药性。”