ダイコンのオグラ型雄性不稔細胞質に対する稔性回復遺伝子のクローニング

日本萝卜小仓型雄性不育细胞质中育性恢复基因的克隆

• 批准号: 08760007
• 负责人: 寺地 徹
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kyoto Sangyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760007/
• 关键词: 稔性回復遺伝子; ダイコン; 雄性不稔; AFLP; ミトコンドリア

本研究課題ではダイコンのオグラ型雄性不稔細胞質に対する稔性回復遺伝子の単離を究極の目的に分子遺伝学的実験を行った。今年度の実験では遺伝子を実際にクローニングすることはできなかったが、そのための基礎となる稔性回復遺伝子と連鎖するDNAマーカーの選抜について、方法論的に格段の進展をみた。すなわち、申請書記載のRAPD法に変えて、AFLP法を非RI環境下で実施できるよう改良し適用した結果、連鎖DNAマーカーの選抜効率が飛躍的にあがった。具体的には、植物材料としてダイコン雄性不稔系統'MS源助'と稔性回復系統'コメット'、ならびにこれら2系統の交配により得られた多数のF2個体を用い、定法によってまずこれらの全DNAを調製した。F2各個体の稔性を調査して可稔・不稔に区分けした後、区ごとにDNAを等量ずつ混合し、可稔・不稔両バルクDNAを調製した。AFLP分析に用いるプライマーをDig標識し、前述のバルクDNAを鋳型にPCRを行った後、増幅DNA断片をポリアクリルアミドゲル電気泳動により分離した。DNA断片をナイロン膜へ転写した後、アルカリフォスファターゼを結合した抗Dig抗体を反応させ、化学発光によりX線フィルムを露光した。この方法により非RI環境下で従来のRI標識による方法と同等のAFLPパターンを初めて検出することができた。本実験では、僅か2つのプライマーペアにより、約130ものバンドを検出することができたが、可稔・不稔両バルク間のAFLPパターンはほとんど同一であった。その中で不稔バルクには存在せず、可稔バルクに特異的に存在するAFLPバンドを1本発見することができた。また、親系統のAFLPパターンの解析から、このバンドが'コメット'由来であることもわかった。現在、このバンドをクローニングして解析するとともに、稔性回復遺伝子単離の起点として適当か否か種々の検討を重ねている。

This study aims to develop molecular genetics for the ultimate purpose of determining the genetic diversity of male sterility in the cytoplasm. This year's research on DNA sequencing and the evolution of DNA sequencing and methodology has been carried out. The RAPD method and AFLP method were applied in non-RI environment, and the results were improved. The selection efficiency of linked DNA was improved. The specific plant material and plant material were used for male sterility system, MS source system and fertility recovery system. Most of the F2 individuals were used for male sterility system and MS source system. F2 individual fertility was investigated, and the region was divided into two parts: the region was mixed with the region, and the region was modulated with the region. AFLP analysis was carried out using the Dig Marker, PCR amplification of DNA fragments, and electrophoresis. DNA fragments are isolated from the DNA membrane, and the DNA fragments are exposed to X-ray light. This method is similar to AFLP identification in non-RI environment. This is the first time that we've seen this. We've only got 2 AFLP tags. We've got about 130 AFLP tags. We've got the same AFLP tags. There is no such thing as an AFLP in the middle of the world. There is no such thing as an AFLP in the middle of the world. AFLP analysis of parent systems Now, this is the first time that we've had a chance to analyze this problem, and we've had a chance to discuss it again.

项目成果

村山誠治・山岸博・寺地徹: "ダイコンにおけるAFLP分析I、バルク法を用いたオグラ稔性回復遺伝子に連鎖するAFLPマーカーの選択" 育種学雑誌. 第46・別2(発表予定). (1997)

Seiji Murayama、Hiroshi Yamagishi、Toru Terachi：“日本萝卜的 AFLP 分析 I，使用批量方法选择与 Ogura 育性恢复基因相关的 AFLP 标记”《育种科学杂志》第 46 期，第 2 部分（1997 年）。 ）