標的指向型ファージ提示法とナノ粒子技術の融合による次世代ペプチド医薬品開発

结合靶向噬菌体展示方法和纳米颗粒技术开发下一代肽药物

• 批准号: 22K19102
• 负责人: 三原 久和
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-06-30 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K19102/
• 关键词: ペプチド; リガンド; ファージ提示法; ナノ粒子; クラスター効果; 次世代医薬品

ガンを含むさまざまな疾患の治療に抗体が広く利用されている。抗体医薬品は標的生体分子のみに特異的かつ高い結合活性で作用するため、低分子医薬品と比較して副作用が少ない。しかし、高い製造コストや厳密な品質管理が必要であるため、安価に製造可能かつ品質管理が容易な抗体代替医薬品の開発が課題となっている。本研究では、申請者が独自に開発した標的指向型ファージ提示法によるペプチドリガンド探索と、クラスター効果を利用してリガンドの結合活性を飛躍的に向上させるナノ粒子技術を融合させることにより、ナノ粒子型ペプチド医薬品を開発することを目的とした。今年度は、ガラクトース結合性レクチンの1つで、ガン関連タンパク質であるガレクチン3を標的として、ペプチドリガンド探索を実施した。ガラクトース誘導体を化学合成し、ファージ上に提示したペプチドライブラリに選択的に化学修飾することにより、ガラクトース修飾環状ペプチドファージライブラリを構築した。ガレクチン3を大腸菌発現系を用いて発現・精製し、ビオチン化した後、ストレプトアビジン磁気ビーズ上に固定し、スクリーニングに用いた。スクリーニング条件をさまざまに検討し最適化した後、バイオパニングによるスクリーニングを実施した結果、ガレクチン3に結合するペプチドを提示したファージの濃縮が確認できた。ファージをクローニングし、DNA配列解析を行った結果、特定のペプチド配列の同定に成功した。また、ファージELISAを行った結果、同定したペプチド配列の1つがガレクチン3に対して高い結合活性を示すことを明らかにした。さらに、蛍光シリカナノ粒子の調製法も種々検討を行い、次年度の糖ペプチド修飾蛍光シリカナノ粒子の創製の基盤を確立した。

Youdaoplaceholder0 を を contains むさまざまな disease <s:1> treatment に antibodies が broad く utilizes されて されて る る. Medical 薬 quality は mark production body molecules の み に specific か つ い combined with high active role で す る た め, low molecular medicine 薬 と compare し て less side effects が な い. し か し, manufacturing high い コ ス ト や 厳 dense な が necessary quality control で あ る た め, Ann 価 possible に か つ が easy な antibody instead of medical quality management 薬 product の open 発 が subject と な っ て い る. This study で は, applicants が に alone 発 し た target oriented フ ァ ー ジ prompt method に よ る ペ プ チ ド リ ガ ン ド exploring と, ク ラ ス タ ー unseen fruit を using し て リ ガ ン ド の combining に of active を leap upward さ せ る ナ ノ particle technology を fusion さ せ る こ と に よ り, ナ ノ particle type ペ プ チ ド medical 薬 product を open 発 す る こ と を purpose と し た. Our は, ガ ラ ク ト ー ス associativity レ ク チ ン の 1 つ で, ガ ン masato even タ ン パ ク qualitative で あ る ガ レ ク チ ン 3 を mark と し て, ペ プ チ ド リ ガ ン ド explore を be applied し た. ガ ラ ク ト ー ス induced し を chemical synthesis, フ ァ ー ジ に tips on し た ペ プ チ ド ラ イ ブ ラ リ に sentaku に chemical modified す る こ と に よ り, ガ ラ ク ト ー ス modified ring ペ プ チ ド フ ァ ー ジ ラ イ ブ ラ リ を build し た. ガ レ ク チ ン 3 を coliform 発 practice while department を い て 発 now, refined し, ビ オ チ ン change し た, ス ト レ プ ト ア ビ ジ ン magnetic 気 ビ ー ズ に し, fixed on ス ク リ ー ニ ン グ に with い た. ス ク リ ー ニ ン グ conditions を さ ま ざ ま に beg し 検 optimization し た, バ イ オ パ ニ ン グ に よ る ス ク リ ー ニ ン グ を be applied し た results, ガ レ ク チ ン 3 に combining す る ペ プ チ ド を prompt し た フ ァ ー ジ の enrichment が confirm で き た. フ ァ ー ジ を ク ロ ー ニ ン グ し, DNA match column line analytical を っ た results, specific の ペ プ チ ド match column の be に successful し た. ま た, フ ァ ー ジ ELISA line を っ た results, with し た ペ プ チ ド match column 1 つ の が ガ レ ク チ ン 3 に し seaborne を て い combined with high activity and shown す こ と を Ming ら か に し た. さ ら に 蛍 light シ リ カ ナ ノ particle の modulation method も 々 beg を 検 い, annual の sugar ペ プ チ ド modified 蛍 light シ リ カ ナ の ノ particles created の base plate を establish し た.

项目成果

ガラクトース結合タンパク質の解析を指向したリガンド修飾蛍光シリカナノ粒子の創製

创建配体修饰的荧光二氧化硅纳米颗粒用于分析半乳糖结合蛋白

• 发表时间: 2023
• 作者: 岡田智;齋木翔太;中村浩之;松浦 右京・三原 久和・堤 浩
• 通讯作者: 松浦 右京・三原 久和・堤 浩