权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

神経細胞の軸索誘導における分子メカニズムの同定

神经元轴突引导分子机制的鉴定

基本信息

批准号：
04F04712
负责人：
成宮周
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、繊維芽細胞の遊走・走化性に必要なシグナル分子がマウスの小脳顆粒細胞の遊走や軸索ガイダンスにも共通して重要であるかを解明することを目標とする。現在までに、それらの細胞系の初代培養手法を樹立した。単層培養グリア細胞上での小脳顆粒細胞の培養とともに、2次元ないし3次元における小脳顆粒細胞の分散培養や凝集培養での細胞動態が検討された。特に小脳顆粒細胞の凝集からの培養では、3次元のコラーゲンゲル内の培養でも2次元の培養でも印象的な神経突起伸長が観察された。引き続き解析には、蛍光顕微鏡での観察に適した後者の2次元培養を選択した。マウス胎児繊維芽細胞(MEF)については、心臓・肺・腎臓・体壁組織のうち、肺・体壁から単離したものが血小板由来成長因子(PDGF-BB)の濃度勾配に対して走化性を示したため、体壁由来のMEFを選択した。このように確立した初代培養系の走化性を観察するために、改良Dunn走化性チャンバーと多視野自動顕微鏡を用いたハイスループット観察系を樹立した。更に、RT-PCRによって、Cdc42サブファミリー(Cdc42,Tc10,Tcl,Chp)、Racサブファミリー(Rac1,2,3 and RhoG)のGTPアーゼがMEFに発現することを確認し、それらのcDNAを単離した。これらの分子の細胞遊走における役割や機能補完を解析する目的で、RNA干渉法を最適化した。現在のところ、Cdc42ノックダウンされたMEFが、細胞体の収縮とともに長く伸びた形態を示し、部分的な遊走の異常を示すことが観察された。しかしながら、走化性は保たれることから今まで重要と考えられてきたCdc42のシグナルとは別のシグナル機構が繊維芽細胞の走化性を制御することが示唆された。更に、今後Cdc42サブファミリーの2種の細胞系の遊走における役割を比較できるように、小脳顆粒細胞におけるRNA干渉法の最適化も行った。

In this study, it is necessary to change the nature of the cells, the molecules, the cells, the cells. At present, the primary culture of the cell line has been established in the first generation. Cell culture, cell dynamics, cell cycle, cell dynamics, cell cycle, cell dynamics, cell dynamics The special small particles agglutinate the cells of the cells, the cells of the cells agglutinate the cells of the cells, the cells of the cells agglutinate, the cells of the three-dimensional culture, the culture of the second-order culture, the elongation of the protuberance, the elongation of the image. After the introduction to the analysis and analysis of the data, the two-dimensional training method is selected. Fetal fetal germ cell (MEF), heart, lung, lung, lung To make sure that the primary culture system is to observe the evolution of the Dunn, and to improve the evolution of the system. Check, RT-PCR, Cdc42, Rac1,2,3 and RhoG, Rac1,2,3 and RhoG, GTP, MEF, confirm, cDNA, isolate. The mechanical cell cutter can be used to analyze the purpose of the machine, and the RNA method can be used to optimize the performance. Now, there are some signs of MEF, such as cell growth, cell growth, morphology, and some of them show that they are not normal, and some of them are not. This is a very important issue. Today, you need to know that you need to improve your Cdc42 management. You need to know that your organization is responsible for the maintenance of germ cells. In the future, the two cell lines of Cdc42 will be used in the future. In the future, the two cell lines will be cut in service, and the RNA dry cell method will be used to optimize the operation.