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三日熱マラリア原虫の実用的in vitro培養系の確立に向けた開発研究

旨在建立实用的间日疟原虫体外培养系统的开发研究

基本信息

批准号：
22K19441
负责人：
金子修
金额：
$ 4.08万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-06-30 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K19441/
关键词：
マラリア培養 Plasmodium vivax Plasmodium cynomolgi Plasmodium knowlesi

项目摘要

三日熱マラリア原虫はヒトの幼若赤血球に侵入し増殖するが、大量のヒト幼若赤血球をルーチンに入手することは困難であるため実用的な培養系が存在しない。そこで、熱帯熱マラリア原虫のヒト成熟赤血球を認識するリガンドを三日熱マラリア原虫に導入することで、ヒト成熟赤血球に侵入し、発育することができる三日熱マラリア原虫の作出を目指す。この原虫を用いることで、本原虫の実用的な培養系が確立できると考える。初年度はP. knowlesiを用いて作製するリガンド発現プラスミドの評価とP. knowlesiにおける表現型を検討することを計画した。成熟ヒト赤血球を認識するリガンド一つの遺伝子読み枠を熱帯熱マラリア原虫のゲノムDNAから増幅し、三日熱マラリア原虫RBLプロモーターにて発現するコンストラクトを構築した。実験室でサル赤血球を用いて継代維持しているPlasmodium knowlesi培養株にリガンド発現プラスミドを導入実験を行った。もう一つのリガンドについてプラスミドデザインを終了した。一方、次年度に予定していたPlasmodium cynomolgiを使う実験のために、長崎大学で継代培養をする系の立ち上げを進めた。当初、本原虫の継代培養ができなかったため、さまざまな培養条件を検討した結果、使用するサルの赤血球（アカゲザル、カニクイザル、ニホンザル）のいずれでも問題なく増殖するが、培地に加える血清成分の種類が原虫が増殖できるか否かを左右する重要な因子であることを見出した。培養系が確立したため、次年度に計画していたP. cynomolgiへのEBA175発現プラスミドの導入を行った。

Three-day fever malarial protozoa はヒトのyoung erythrocytes invade and multiply するが, and a large number of のヒトyoung erythrocytes The blood cell をルーチンに starts with the することは difficult であるため and the な culture system が exists しない.そこで, 热帯热マラリア protozoa のヒト mature erythrocytes を recognition するリガンドを三日热マラリア protozoa に introduction することで, ヒト mature red blood cells invade し, 発生することができる三日热マラリア protozoa のを Eye refers to す. The culture system used for protozoa and protozoa has been established by いることで. In the first year of the year はP. knowlesi におけるphenomenon を検 Discussion することをplan した. Mature ヒトerythroblast を recognize するリガンド一つの缝子読み枠を热帯热マラリアprotozoa のゲノムDNAから Increase the width of し, 三日热マラリア protozoa RBL プロモーターにて発开するコンストラクトをbuild した. The しているPlasmodium knowlesi culture strain maintained in the 実験 room by でサルerythroblast を is now プラスミドを introduced into 実験を行った.もう一つのリガンドについてプラスミドデザインをEnd した. One party, the next year's Plasmodium cynomolgi していたPlasmodium cynomolgi う実験のために, Nagasaki University's で継代 fostering department の立ち上げを进めた. At the beginning, the original culture of the protozoa was carried out under the following conditions: To find out the result, use the red blood cells (アカゲザル, カニクイザル, ニホンザル)のいずれでもQuestionなくproliferationするが、PediにplusえるTypes of serum ingredientsが protozoa が multiply できるかかを around する important な factor であことを见出した. The training system has been established and the next year's plan has been completed. The cynomolgi EBA175 program has been introduced and introduced.