三日熱マラリア原虫の実用的in vitro培養系の確立に向けた開発研究

三日熱マラリア原虫はヒトの幼若赤血球に侵入し増殖するが、大量のヒト幼若赤血球をルーチンに入手することは困難であるため実用的な培養系が存在しない。そこで、熱帯熱マラリア原虫のヒト成熟赤血球を認識するリガンドを三日熱マラリア原虫に導入することで、ヒト成熟赤血球に侵入し、発育することができる三日熱マラリア原虫の作出を目指す。この原虫を用いることで、本原虫の実用的な培養系が確立できると考える。初年度はP. knowlesiを用いて作製するリガンド発現プラスミドの評価とP. knowlesiにおける表現型を検討することを計画した。成熟ヒト赤血球を認識するリガンド一つの遺伝子読み枠を熱帯熱マラリア原虫のゲノムDNAから増幅し、三日熱マラリア原虫RBLプロモーターにて発現するコンストラクトを構築した。実験室でサル赤血球を用いて継代維持しているPlasmodium knowlesi培養株にリガンド発現プラスミドを導入実験を行った。もう一つのリガンドについてプラスミドデザインを終了した。一方、次年度に予定していたPlasmodium cynomolgiを使う実験のために、長崎大学で継代培養をする系の立ち上げを進めた。当初、本原虫の継代培養ができなかったため、さまざまな培養条件を検討した結果、使用するサルの赤血球（アカゲザル、カニクイザル、ニホンザル）のいずれでも問題なく増殖するが、培地に加える血清成分の種類が原虫が増殖できるか否かを左右する重要な因子であることを見出した。培養系が確立したため、次年度に計画していたP. cynomolgiへのEBA175発現プラスミドの導入を行った。

三日熱マラリア原虫はヒトの幼若赤血球に侵入し増殖するが、大量のヒト幼若赤血球をルーチンに入手することは困難であるため実用的な培養系が存在しない。そこで、熱帯熱マラリア原虫のヒト成熟赤血球を認識するリガンドを三日熱マラリア原虫に導入することで、ヒト成熟赤血球に侵入し、発育することができる三日熱マラリア原虫の作出を目指す。この原虫を用いることで、本原虫の実用的な培養系が確立できると考える。初年度はP. knowlesiを用いて作製するリガンド発現プラスミドの評価とP. knowlesiにおける表現型を検討することを計画した。成熟ヒト赤血球を認識するリガンド一つの遺伝子読み枠を熱帯熱マラリア原虫のゲノムDNAから増幅し、三日熱マラリア原虫RBLプロモーターにて発現するコンストラクトを構築した。実験室でサル赤血球を用いて継代維持しているPlasmodium knowlesi培養株にリガンド発現プラスミドを導入実験を行った。もう一つのリガンドについてプラスミドデザインを終了した。一方、次年度に予定していたPlasmodium cynomolgiを使う実験のために、長崎大学で継代培養をする系の立ち上げを進めた。当初、本原虫の継代培養ができなかったため、さまざまな培養条件を検討した結果、使用するサルの赤血球（アカゲザル、カニクイザル、ニホンザル）のいずれでも問題なく増殖するが、培地に加える血清成分の種類が原虫が増殖できるか否かを左右する重要な因子であることを見出した。培養系が確立したため、次年度に計画していたP. cynomolgiへのEBA175発現プラスミドの導入を行った。