生理活性糖類・硫酸化グリコサミノグリカンの構造と生合成に関する研究

生物活性糖和硫酸化糖胺聚糖的结构与生物合成研究

• 批准号: 09044345
• 负责人: 菅原 一幸
• 金额: $ 3.78万
• 依托单位: Kobe Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for international Scientific Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09044345/
• 关键词: コンドロイチン硫酸D; コンドロイチン硫酸E; 神経突起; グルクロン酸-3-硫酸; グルクロン酸転移酵素; N-アセチルガラクトサミン転移酵素; プロテオグリカン; コンドロイチン硫酸; 硫酸化; グリコサミノグリカン; ヘパラン硫酸; リン酸化; オリゴ糖; NMR

菅原、Lindahlらは、ウシ胎児血清およびマウス肥満細胞腫に見い出したコンドロイチン硫酸合成酵素(GalNAc転移酵素II、GlcA転移酵素II)の精製を行い、性質を明かにした。小川、田村らは、化学合成によって酵素基質を供した。菅原、Dell、Khooらは、イカ軟骨コンドロイチン硫酸Eから新規の四糖を単離し、完全一次構造を決定し、新規のグルクロン酸-3-硫酸構造を示した。菅原とFaissnerらは、珍しい二糖単位であるD-unit[GlcA(2-O-sulfate)β1-3GalNAc(6-O-sulfate)]を含むサメ軟骨由来のコンドロイチン硫酸Dがラット脳の海馬由来の培養神経細胞に対して神経突起伸長促進活性を示すことを明らかにした。また、この活性はマウス脳の未熟なグリア細胞の産生ずるコンドロイチン硫酸プロテオグリカンであるDSD-1-PGのコンドロイチン硫酸側鎖に対する単クローン抗体473HDによって特異的に阻害されることも見い出し、D-unitが神経突起伸長促進活性に関与している可能性を指摘した。さらに、市販のサメ軟骨由来のコンドロイチン硫酸Dを分画し、抗体に対する親和性が高い画分ほど高い神経突起伸長促進活性を示すことを明らかにした。また、抗体に対する親和性が高い画分ほどD-unitの含量も高いことも判明した。抗体カラムに結合しなかった画分は神経突起伸長促進活性を殆ど示さず、また、D-unitの含量も結合画分と比較してかなり低かった。さらに、マウス脳から精製したDSD-1-PGをコンドロイチナーゼで分解してHPLCで分析することによって、5%のD-unitを含むことも明らかにした。このようにコンドロイチン硫酸Dの神経突起伸長促進活性にはD-unitが関与していることを強く示唆することが出来た。

Sugawara, Lindahl, and their fetal serum and fat cell tumors were identified by the purification and characterization of sulfate synthase (GalNAc transferase II, GlcA transferase II). Ogawa, Tamura, chemical synthesis substrate Sugawara, Dell, Khoo, Khoo. The D-unit[GlcA(2-O-sulfate)β1-3GalNAc(6-O-sulfate)], which contains the D-unit[GlcA(2-O-sulfate)β1-3GalNAc(6-O-sulfate)], was used to demonstrate the activity of promoting neuronal process elongation in cultured neurons derived from the hippocampus. In addition, this activity is specifically inhibited by the monoclonal antibody 473HD, which is targeted by DSD-1-PG's adenosine sulfate receptor during the production of immature fibroblast cells. This suggests that this may be related to the D-unit neuronal process elongation-promoting activity. In addition, the affinity of the antibody to the cartilage origin was high, and the activity of promoting the elongation of the nervous system was high. The affinity of the antibody was high, and the content of D-unit was high. The antibody binding activity was lower than that of the D-unit binding activity. DSD-1-PG was purified by HPLC and analyzed by 5% D-unit. The D-unit is related to the increase in the number of cells in the brain.

项目成果

Lidholt kerstin: "Assessment of glycosaminoglycan-protein linkage tetrasaccharides as acceptors for GalNAc-and GlcNAc-transferases from mouse mastocytoma." Glycoconjugate J.14(6). 737-742 (1997)

Lidholt kerstin：“评估糖胺聚糖-蛋白质连接四糖作为小鼠肥大细胞瘤 GalNAc 和 GlcNAc 转移酶的受体。”

木下 亜希子: "Novel Tetrasaccharides Isolated from Squid Cartilage Chondroitin Sulfate E Contain Unusual Sulfataed Disaccharide Units GlcA (3-O-sulfate) βl-3GalNAc (6-O-sulfate) orGlcA (3-O-sulfate) βl-3GalNAc (4, 6-O-disulfate)" J.Biol.Chem.272(32). 19656-284

Akiko Kinoshita：“从鱿鱼软骨硫酸软骨素 E 中分离的新型四糖含有不寻常的硫酸化二糖单元 GlcA（3-O-硫酸盐）β1-3GalNAc（6-O-硫酸盐）或 GlcA（3-O-硫酸盐）β1-3GalNAc（4， 6-O-二硫酸盐）”J.Biol.Chem.272(32).19656-284

Clement Albrecht: "The DSD-1-epitope depends on sulfation, correlates with chondroitin sulfate D motifs, and is sufficient to promote neurite outgrowth"J.Biol.Chem.. 273(43). 28444-28453 (1998)

Clement Albrecht：“DSD-1 表位取决于硫酸化，与硫酸软骨素 D 基序相关，并且足以促进神经突生长”J.Biol.Chem.. 273(43)。

Lidholt, Kerstin: "Assessment of Glycosaminoglycan-Protein Linkage Tetrasaccharides as Acceptors for GalNAc- and GlcNAc-Transferases from Mouse Mastocytoma" Glycoconjugate J.14(6). 737-742 (1997)

Lidholt，Kerstin：“糖胺聚糖-蛋白质连接四糖作为小鼠肥大细胞瘤 GalNAc 和 GlcNAc 转移酶受体的评估”糖缀合物 J.14(6)。

灘中 里美: "The DSD-1-Epitope Depends on Sulfation, Correlates with Chondroitin Sulfate D Motifs, and is Sufficient to Promote Neurite Outgrowth" J.Biol.Chem.273(43). 28444-28453 (1998)

Satomi Nadakan：“DSD-1 表位依赖于硫酸化，与硫酸软骨素 D 基序相关，并且足以促进神经突生长”J.Biol.Chem.273(43) (1998)。