パートタイムプロテオグリカンへの糖鎖付加の分子スイッチの同定とその機能調節の解明

兼职蛋白聚糖糖基化分子开关的鉴定及其功能调节的阐明

• 批准号: 11877390
• 负责人: 菅原 一幸
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kobe Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877390/
• 关键词: コンドロイチン硫酸; グリコサミノグリカン; プロテオグリカン; 硫酸化オリゴ糖; 2-アミノベンズアミド; 蛍光標識; NALDI-TOF; MS; プロトンNMR; 硫酸化; リン酸化; ヘパラン硫酸; デルマタン硫酸; ヘパリン

グリコサミノグリカンのタンパク質との結合領域は、GlcA-Gal-Gal-Xyl-という共通の四糖構造からなっている。しかし、我々はこの領域に硫酸基やリン酸基などによる微細な修飾構造が存在することを証明し、その構造多様性が生合成に関与する可能性を指摘してきた。ただし、この領域は、グリコサミノグリカンの長い糖鎖全体からみると少量しか存在しないため、その構造解析が非常に困難であった。これまでは、アルカリ性の条件下でNaB^3H_4を用いた還元を行い、グリコサミノグリカン鎖の還元末端を放射標識した後に構造研究が行われてきた。今回我々は、この領域の微量分析法を開発した。ピーリング反応を避けながらβエリミネーションを行うための、LiOHを用いた温和な条件を検討し、実際にコンドロイチン/デルマタン硫酸から、タンパク質との結合領域に由来するオリゴ糖を調製した。得られたオリゴ糖は、酵素消化、MALDI-TOF/MS分析、^1HNMR解析などによって構造決定した。大部分のものは、既に報告されたものと同じ構造をしていたが、新規のものも得た。構造が既に報告されていたオリゴ糖は、今後標準品として利用できるであろう。また、2-アミノベンズアミドを使ってこれらのオリゴ糖を蛍光標識し、結合領域の微量分析方法を確立した。今後は、グリコサミノグリカンの生合成に重要であると予想される結合領域の微細構造が、より詳細に解析されるであろう。

The common tetrasaccharide structure of GlcA-Gal-Gal-Xyl-C is composed of two kinds of sugar. The existence of fine modified structures in the field of sulfuric acid and acid is proved, and the possibility of their structural diversity is pointed out. It is very difficult to analyze the structure of the structure. Under these conditions, the structure of NaB_3H_4 is studied. In this paper, microanalysis in this field is developed. In addition, the use of LiOH in the production of sulfuric acid and in the production of sulfuric acid in the production of sulfuric acid and in the production of sulfuric acid in the production of sulfuric acid is also discussed. The results of enzyme digestion, MALDI-TOF/MS analysis and HNMR analysis were determined. Most of them are reported to be in the same category. The structure is reported to be in use in the future. The method of microanalysis for the determination of trace amounts of glucose in the presence of 2-aminoethyl acetate was established. In the future, the micro-structure of the combination field will be important and analyzed in detail in the production and synthesis of.

项目成果

坂口裕美: "Isolation of Reducing Oligosaccharides Chains from the Chondroitin/Dermatan Sulfate-Protein Linkage Region and Preparation of Analytical Probes by Fluorescent Labeling with 2-Aminobenzamide"J.Biochem.. 129(9). 107-108 (2001)

Hiromi Sakaguchi：“从软骨素/硫酸皮肤素-蛋白质连接区域分离还原寡糖链并通过 2-氨基苯甲酰胺荧光标记制备分析探针”J.Biochem.. 129(9) (2001)。