シアリルルイス糖鎖及びアナログの微生物プロセスによる生産

通过微生物法生产唾液酸路易斯糖链和类似物

• 批准号: 10134218
• 负责人: 飯島 信司
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10134218/
• 关键词: Streptococcus agalactiae; きょう膜多糖; 糖転移酵素; グローニング; 発現; 多糖

本年度は、Streptococcus agalactiaeの糖転移酵素遺伝子群のクローニングをすでに取得していた3.5kbのDNA断片をもとに行い、その大部分を取得した。クローン化した約17kbの領域にはS.agalactiae type Iaの多糖の繰り返し単位であるNeuNAc2→3Ga11→4GlcNAc1→3Gal1→4Glcのうちシアル酸を除く4糖の転移酵素遺伝子が含まれていた。この領域の塩基配列をすべて決定したところ、この遺伝子群は上流側から制御遺伝子、鎖長決定に関与する遺伝子、糖転移及びポリマー化に関与する遺伝子、輸送に関する遺伝子が順に並んでいることが判明した。また制御遺伝子の上流にはトランスポゾンの存在が確認され、他のstreptococcus属の多糖合成酵素遺伝子群と同様の構造をとっていることもわかった。輸送に関与する遺伝子の下流にはシアル酸合成系遺伝子群の存在も確認された。この遺伝子群の構造からこの多糖はまずシアル酸を除いた4糖単位が合成され、ポリマー化された後でシアル酸が付加されるものと予測できる。プライマー伸長実験とRT-PCRの結果から、この遺伝子群の転写は少なくとも2つの箇所から起こっているものと考えられる。そのうちのひとつは鎖長決定遺伝子と思われるcpsCとグルコース転移酵素遺伝子(cpsD)の間であり、他はcpsRの上流である。また転写終結シグナルは今のところ確認されていない。我々はグルコース転移酵素遺伝子cpsD、ガラクトース転移酵素遺伝子(cpsF、cpsI)、GlcNAc転移酵素遺伝子(cpsH)の大腸菌での発現にも成功しており、大腸菌でオリゴ糖合成が可能であることも示している。

This year, most of the 3.5 kb DNA fragments of Streptococcus agalactiae were obtained. The 17kb domain contains the sequence of S.agalactiae type Ia polysaccharide, NeuNAc2→3Ga11→4GlcNAc1→3Gal1→ 4Glc, and the sequence of S. agalactiae type Ia polysaccharide, NeuNAc2 → 3Ga 11 →4Glc. This domain is based on the decision of the upstream side, the control of the transmission, the determination of the length of the transmission, the sugar shift and the transmission of the transmission, and the identification of the transmission The existence of streptococci in the upper stream of streptococci was confirmed. The structure of streptococci polysaccharide synthesis enzyme subgroup and the structure of streptococci were also confirmed. The presence of a downstream gene in the transport system was confirmed. The structure of this group of polysaccharides is divided into four sugar units, which are synthesized, synthesized and predicted. The results of RT-PCR are as follows: 1. The number of genes in the gene pool is less than 2. CpsC is the most important factor in determining the length of a gene. This is the end of the story. We have successfully developed E. coli with CpsD, CpsF, CpsI, GlcNAc and CpsH, and we have successfully developed E. coli with CpsD, CpsF, CpsI, GlcNAc and CpsH.

项目成果

Shin Yamamoto, Katsuhide Miyake, Masaki Watanabe, Michio Ohta, Shinji Iijima: "Molecular characterization of type-specific capsular polysaccharide biosynthesis gene of Streptococcus agalactiae type Ia" Journal of Bacteriology. (発表予定). (1999)

Shin Yamamoto、Katsuhide Miyake、Masaki Watanabe、Michio Ohta、Shinji Iijima：“无乳链球菌 Ia 型特异性荚膜多糖生物合成基因的分子特征”《细菌学杂志》（1999 年）。