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シアリルルイス糖鎖及びアナログの微生物プロセスによる生産

通过微生物法生产唾液酸路易斯糖链和类似物

基本信息

批准号：
10134218
负责人：
飯島信司
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、Streptococcus agalactiaeの糖転移酵素遺伝子群のクローニングをすでに取得していた3.5kbのDNA断片をもとに行い、その大部分を取得した。クローン化した約17kbの領域にはS.agalactiae type Iaの多糖の繰り返し単位であるNeuNAc2→3Ga11→4GlcNAc1→3Gal1→4Glcのうちシアル酸を除く4糖の転移酵素遺伝子が含まれていた。この領域の塩基配列をすべて決定したところ、この遺伝子群は上流側から制御遺伝子、鎖長決定に関与する遺伝子、糖転移及びポリマー化に関与する遺伝子、輸送に関する遺伝子が順に並んでいることが判明した。また制御遺伝子の上流にはトランスポゾンの存在が確認され、他のstreptococcus属の多糖合成酵素遺伝子群と同様の構造をとっていることもわかった。輸送に関与する遺伝子の下流にはシアル酸合成系遺伝子群の存在も確認された。この遺伝子群の構造からこの多糖はまずシアル酸を除いた4糖単位が合成され、ポリマー化された後でシアル酸が付加されるものと予測できる。プライマー伸長実験とRT-PCRの結果から、この遺伝子群の転写は少なくとも2つの箇所から起こっているものと考えられる。そのうちのひとつは鎖長決定遺伝子と思われるcpsCとグルコース転移酵素遺伝子(cpsD)の間であり、他はcpsRの上流である。また転写終結シグナルは今のところ確認されていない。我々はグルコース転移酵素遺伝子cpsD、ガラクトース転移酵素遺伝子(cpsF、cpsI)、GlcNAc転移酵素遺伝子(cpsH)の大腸菌での発現にも成功しており、大腸菌でオリゴ糖合成が可能であることも示している。

This year, Streptococcus Agalactiae's glycotransferase residues are obtained from the 3.5kb DNA fragments from the のクローニングをすでに. S.agalactiae type NeuNAc2→3Ga11→4GlcNAc1→ 3Gal1 → 4Glc のうちシアル acid を in addition く 4 sugar の転 transfer enzyme 缝子がまれていた.この区の塩组组をすべてdeterminationしたところ, この缝子群は上线からcontrol缧缝子, locklength decision に关与するIt is clear that the transfer of the remaining 伝子, the sugar transfer and the びポリマー化に口 and the する伝子、transportation に关する伝子が顺に合んでいることがare made clear. The existence of また槝子の上上にはトランスポゾンの confirms され、his のstrepto The coccus genus is a polysaccharide synthesis enzyme genetic subgroup and has the same structure as the polysaccharide synthesis enzyme. The existence of the downstream にはシアル acid synthesis system and the する缝子のfluid has been confirmed. The structure of the この缝subgroupのpolysaccharideはまずシアル acidをexcept the いた4 sugar monomer combination After becoming a され, ポリマー化された, the でシアル acid が pays and adds a されるものと Predicted できる.プライマーStretch 実験とRT-PCRのRESULTSから、この缝子群の転写は小なくとも2つの箇sho から开こっているものと卡えられる.そのうちのひとつは the lock has decided to leave the widow 伝子と思われるcpsCとグルコースThe upper part of cpsD (cpsD) and the upper part of cpsR. The ending of また転シグナルは日のところconfirmed されていない. I am a 々はグルコース転zyme molecule cpsD, a ガラクトース転zyme molecule (cpsF, cpsI), GlcNAc袢shift Enzyme residue (cpsH) has been shown to be successful in coliform and sugar synthesis is possible in coliform.