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鳥類の胚操作と遺伝子破壊鳥類作製のための基礎研究

鸟类胚胎操作和基因破坏鸟类生产的基础研究

基本信息

批准号：
10876073
负责人：
飯島信司
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10876073/
关键词：
ニワトリウズラ卵巣卵子人工授精孵化始原生殖細胞体外培養

项目摘要

イギリスのペリーによって開発されたニワトリ受精卵の体外培養システムは、雌の輸卵管より放卵される1日前の濃厚卵白のみついた受精卵をとりだし、生体外で培養孵化するもので1細胞期の卵子への遺伝子導入を可能にした。しかし、この方法では、1羽の雌鳥から1つの受精卵しか得られないために効率が悪い。そこで、鳥類の卵巣中より数個の未成熟な卵をin vitroで成熟させ、体外受精を行いトランスジェニッグチキンの孵化までをin vitroで行うことを目的とした。このためモデル系として、取り扱いが簡単なウズラのメスの腹部を解剖し、様々な大きさの未成熟卵子が存在している卵巣を摘出した。最も大きな直径1.5〜2cmの卵子の周りに存在する卵黄膜を注意深く取り除いた後、BSA(3mg/ml)を含むDMEM培地で培養した。またこれよりも小さな卵子はBSA(3mg/ml)、インシュリン(5μg/ml)、トランスフェリン(5μg/ml)、EGF(1ng/ml)を含むDMEM培地で培養した。未成熟卵子の成熟の度合いを示すものとしてGVB(germlnal vesicle breakdown)を観察した。ウズラの雌からﾞ採取した直径が最も大きな約1.5cm卵子とその次に大きな卵子は、解剖後の観察で卵子の周りに存在する卵黄膜を取り除くと卵核胞を確認することができた。また1日培養後にGVBを観察することができた。これらの卵子には黄色卵黄も存在し成熟の可能性も考えられるが、成熟の確認を行うため現在人工受精法を検討している。また卵子に分化する始原生殖細胞を分離する技術を開発し、ウズラ受精卵1個あたり数個の始原生殖細胞を分離し、始原生殖細胞をターゲッティングして遺伝子を導入するシステムを開発した。

In vitro culture of fertilized eggs, in vitro incubation of fertilized eggs. 1 female bird 1 fertilized egg 2 fertilized egg 3 fertilized egg 4 fertilized egg 5 fertilized egg 6 fertilized egg 7 fertilized egg 8 fertilized egg 7 fertilized egg 8 fertilized egg 9 fertilized egg 9 fertilized In vitro fertilization, the eggs of birds are immature and mature. In vitro fertilization, the eggs are hatched. The immature eggs are removed from the abdomen of the egg. The eggs with the largest diameter of 1.5 ~ 2cm were cultured in DMEM medium containing BSA(3mg/ml) after removal of yolk membrane. The eggs were cultured in DMEM medium containing BSA(3mg/ml), EGF (5μ g/ml), TNT (5μ g/ml) and EGF(1ng/ml). GVB(Germnal Vessel Breakdown) is an indicator of the maturity of immature eggs. The egg diameter is about 1.5 cm. The egg diameter is about 1.5 cm. After 1 day of cultivation, GVB was observed. The possibility of maturation of eggs with yellow yolk is examined. The method of artificial fertilization is discussed. The development of the technology for the isolation of primordial germ cells from fertilized eggs