鳥類の胚操作と遺伝子破壊鳥類作製のための基礎研究

鸟类胚胎操作和基因破坏鸟类生产的基础研究

• 批准号: 10876073
• 负责人: 飯島 信司
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10876073/
• 关键词: ニワトリ; ウズラ; 卵巣; 卵子; 人工授精; 孵化; 始原生殖細胞; 体外培養

イギリスのペリーによって開発されたニワトリ受精卵の体外培養システムは、雌の輸卵管より放卵される1日前の濃厚卵白のみついた受精卵をとりだし、生体外で培養孵化するもので1細胞期の卵子への遺伝子導入を可能にした。しかし、この方法では、1羽の雌鳥から1つの受精卵しか得られないために効率が悪い。そこで、鳥類の卵巣中より数個の未成熟な卵をin vitroで成熟させ、体外受精を行いトランスジェニッグチキンの孵化までをin vitroで行うことを目的とした。このためモデル系として、取り扱いが簡単なウズラのメスの腹部を解剖し、様々な大きさの未成熟卵子が存在している卵巣を摘出した。最も大きな直径1.5〜2cmの卵子の周りに存在する卵黄膜を注意深く取り除いた後、BSA(3mg/ml)を含むDMEM培地で培養した。またこれよりも小さな卵子はBSA(3mg/ml)、インシュリン(5μg/ml)、トランスフェリン(5μg/ml)、EGF(1ng/ml)を含むDMEM培地で培養した。未成熟卵子の成熟の度合いを示すものとしてGVB(germlnal vesicle breakdown)を観察した。ウズラの雌からﾞ採取した直径が最も大きな約1.5cm卵子とその次に大きな卵子は、解剖後の観察で卵子の周りに存在する卵黄膜を取り除くと卵核胞を確認することができた。また1日培養後にGVBを観察することができた。これらの卵子には黄色卵黄も存在し成熟の可能性も考えられるが、成熟の確認を行うため現在人工受精法を検討している。また卵子に分化する始原生殖細胞を分離する技術を開発し、ウズラ受精卵1個あたり数個の始原生殖細胞を分離し、始原生殖細胞をターゲッティングして遺伝子を導入するシステムを開発した。

イ ギ リ ス の ペ リ ー に よ っ て open 発 さ れ た ニ ワ ト リ の fertilized in vitro cultivation シ ス テ ム は, female の tubal よ り put eggs さ れ の る 1 thick albumen の み つ い た fertilized egg を と り だ し, born で cultivation in vitro incubation す る も の で phase 1 cell の eggs へ の heritage 伝 son import を may に し た. The method of で で, the effect of one <s:1> female bird ために ら1 <s:1> <s:1> fertilized egg られな られな is が悪 が悪. の そ こ で, birds eggs in 巣 よ り several の immature を な eggs in vitro mature で さ せ line, in vitro fertilization を い ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ グ チ キ ン の hatch ま で を in vitro で line う こ と を purpose と し た. こ の た め モ デ ル department と し て, take り Cha い が Jane 単 な ウ ズ ラ の メ ス の abdominal を anatomical し, others 々 な big き さ の immature eggs が exist し て い る eggs 巣 を pick the し た. The greatest も き な 1.5 ~ 2 cm in diameter の eggs の weeks り に exist す る vitelline membrane を note take deep く り い た, BSA (3 mg/ml) を containing む DMEM culture で training し た. Small ま た こ れ よ り も さ な eggs は BSA (3 mg/ml), イ ン シ ュ リ ン (5 mu g/ml), ト ラ ン ス フ ェ リ ン (5 mu g/ml), EGF (1 ng/ml) を む DMEM culture で training し た. The degree of mature <s:1> of immature oocytes is を を, す <s:1> と て て, GVB(germlnal vesicle breakdown)を観, and た. ウ ズ ラ の female か ら ゙ take し た が も most large diameter き な 1.5 cm eggs と そ に の times big き は な eggs, dissection の 観 examine で eggs の weeks り に exist す る vitelline membrane を take り except く と egg nucleus cell を confirm す る こ と が で き た. Youdaoplaceholder0 after 1 day of cultivation, にGVBを観 is observed する とがで とがで た た. こ れ ら の eggs に は yellow yolk も possibility exists し mature の も exam え ら れ る が, mature の confirm を う た め now artificial ShouJingFa を beg し 検 て い る. Beginning ま た eggs に differentiation す る を primordial germ cells separation す る technology を open 発 し, ウ ズ ラ fertilized egg 1 あ た り several の を separation し primordial germ cells, primordial germ cells in the beginning を タ ー ゲ ッ テ ィ ン グ し て heritage 伝 son を import す る シ ス テ ム を open 発 し た.

项目成果

Shinji Mizuarai, Kenichi Nishijima and Shinji Iijima: "Amplification of competitive telomere sequence in living animal cells indnces chromatin instability" Cytotechnology. 印刷中.

Shinji Mizuarai、Kenichi Nishijima 和 Shinji Iijima：“活体动物细胞中竞争性端粒序列的扩增会导致染色质不稳定”《细胞技术》正在出版。