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シアリルルイス糖鎖及びアナログの微生物プロセスによる生産

通过微生物法生产唾液酸路易斯糖链和类似物

基本信息

批准号：
09240216
负责人：
飯島信司
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

シアリルルイス糖鎖は、ガン転移や免疫反応に深く関わっていることが知られている。本研究では、ある種のB群溶血性連鎖球菌Streptococcus agalactiaeがシアリルルイス糖鎖のアナログであるシアリルラクトサミンのポリマーを細胞外多糖として生産することに着目し、遺伝子工学的手法を用いてシアリルルイス糖鎖やアナログを生産することを目的とした。B群溶血性連鎖球菌由来のきょう膜多糖が実際にガン細胞と血管内皮細胞の間の接着を阻害するかどうかを確認するために、この多糖を1lの培養上清からエタノール沈殿、ゲルろ過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィーを経て精製し、最終標品0.5mgを得た。この多糖は分子量約500kDaを示し、1分子当たりシアリルラクトサミン側鎖を少なくとも400残基含むことが推定された。試験管内におけるガン細胞と血管内皮細胞の接着阻害を調べるためにヒト由来の血管内皮細胞をシャーレ-面に培養し、これにインターロイキン-1βを加えてセレクチンの発現を誘導した。そこに転移性の大腸ガン細胞Colo201及び白血病細胞HL60を放射性メチオニンで標識した後加えて接着させた。洗浄後、残った放射能を測定してこれを接着活性とした。インターロイキン-1βを加え、セレクチンを発現させたものでは顕著な接着活性を示すが、加えないものでは全く接着が起こらなかった。またこの多糖を加えると顕著に細胞の接着が阻害された。一方この微生物多糖の生産を効率化するため、S.agalactiae Ia株より多糖の生合成に必要な酵素遺伝子の一部をクローン化し塩基配列を決定した。ホモロジー検索より、このDNA断片には3個の糖転移酵素が含まれると思われる。現在、生合成系遺伝子全体をクローン化することを試みている。

In addition to the above, the author also pointed out that it is necessary to improve the quality of the products. In this study, we investigated the production of exopolysaccharides from Streptococcus agalactiae, a group B hemolytic chain coccus, using genetic engineering techniques. Group B hemolytic linked cocci origin of membrane polysaccharides in the presence of cell and vascular endothelial cell adhesion inhibition, confirmation, polysaccharide in 1l of culture supernatant, purification, final standard 0.5 mg. The polysaccharide has a molecular weight of about 500kDa and is presumed to contain 400 residues. In vitro inhibition of vascular endothelial cells and vascular endothelial cells was investigated. In addition, the radioactive substances in Colo201 and HL60 cells were detected. After washing, residual radioactivity was measured. The first step is to increase the activity of the enzyme and to increase the activity of the enzyme. The polysaccharide was added to the cell and then prevented from damaging it. A part of the enzyme sequence necessary for polysaccharide production in S.agalactiae Ia strain was determined. The DNA fragment contains three sugar transfer enzymes. Now, all the members of the production system are trying to change the situation.