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遺伝子工学を応用した硝化脱窒過程の解析と高効率化

利用基因工程分析硝化反硝化过程并提高效率

基本信息

批准号：
02202221
负责人：
飯島信司
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.前年度にクロ-ン化した亜硝酸還元酵素遺伝子を含むと考えられる11.5kbp <Hind>___ーIII フラグメントをサブクロ-ン化し、詳細な制限酵素地図を作製した。クロ-ニングに使用したオリゴヌクレオチドとクロ-ン化したDNAフラグメントの相同性をサザンハイブリダイゼ-ション法で検討した。この結果オリゴヌクレオチドは、クロ-ン化DNAの端200bpと相同性があることが判明した。そこでこのフラグメント周辺のDNA塩基配列をダイデオキシ法で決定した結果、DNA挿入断片の端から130bp付近にプロ-ブと相補的な塩基配列が存在することがわかった。また塩基配列から推定されるこの前後のアミノ酸配列はさきに精製した酵素のアミノ酸配列と一致し、クロ-ン化されたDNAフラグメントは亜硝酸還元酵素遺伝子に相違ないことが確認された。2.クロ-ン化した亜硝酸還元酵素遺伝子を<trp>___ーおよび<lacZ>___ープロモ-タ-を含む発現ベクタ-に連結し大腸菌に導入した後、ウエスタンブロッティングにより目的遺伝子産物の発現を検出した。その結果、亜硝酸還元酵素抗原のみかけの分子量は約5万であった。活性型亜硝酸還元酵素の分子量は7万であるので、クロ-ン化したDNAフラグメントは酵素全体の約2/3を含んでいると考えられる。また決定したDNA塩基配列から推定されるアミノ酸配列からこの亜硝酸還元酵素抗原は活性型のN末端側が欠如していると考えられ、本酵素の構造遺伝子は、11.5kb <Hind>___ーIIIフラグメント内の4kbp程度の領域に含まれていると推定された。上記実験全般にわたりプラスミドDNAの大量調整はカゴ型攪拌リアクタ-(培養槽)を使用した。

1. In the previous year, the enzyme reducer nitrate was used in the 11.5kbp & lt;Hind>___ test. The enzyme was used to limit the production of enzymes. This is the first time to use the method of "DNA" and "homogeneity". The results show that the 200bp on the end of the DNA is similar to each other in order to determine the difference between the two. This is the first time that the result of the DNA is determined by the method of determining the result, and that the 130bp on the end of the fragment is close to each other. There is an error in the base column of the DNA segment. This is based on the presumption that before and after the determination of acid, the concentration of enzyme, enzyme, acid, DNA, enzyme, enzyme two。 After the addition of lt;trp>___ nitrate and yeast monosodium nitrate, which is known to have been linked to a large amount of bacteria, you can see that the temperature does not change. After the bacteria have been introduced into the bacteria, you will see that the product is not safe. The results showed that the molecular weight of reductase nitrate antigen was about 50 000 kDa. The molecular weight of active nitrite reductase is about 70 million, and the total enzyme is about 2 ppm. The molecular weight of DNA nitrate reductase is about 2 kDa. It is determined that the DNA base configuration is based on the presumption that the reduction enzyme antigens are not as active as the N-terminal antigens of the reductase antigens, the active N-terminal antigens of the enzyme antigens, the active N-terminal antigens of the enzyme antigens, the active N-terminal fragments of the enzyme antigens, the active N-terminal antigens of the reductase antigens, the active N-terminal antigens of the reductase antigens, the active N-terminal antigens of the reductase antigens, the N-terminal antigens of the reductase antigens, the active N-terminal antigens of the reductase antigens, the active N-terminal antigens of the reductase antigens, the N-terminal antigens of the reductase antigens, the active N-terminal antigens of the reductase antigens, the N-terminal antigens of the reductase antigens, the In the last section, there are a large number of whole-type mixtures-- (culture trough)-- using a large number of DNA.