遺伝子工学を応用した硝化脱窒過程の解析と高効率化

利用基因工程分析硝化反硝化过程并提高效率

• 批准号: 02202221
• 负责人: 飯島 信司
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02202221/
• 关键词: 硝化脱窒; 廃水処理; クロ-ニング; 遺伝子組換え; 環境問題; 大腸菌

1.前年度にクロ-ン化した亜硝酸還元酵素遺伝子を含むと考えられる11.5kbp <Hind>___ーIII フラグメントをサブクロ-ン化し、詳細な制限酵素地図を作製した。クロ-ニングに使用したオリゴヌクレオチドとクロ-ン化したDNAフラグメントの相同性をサザンハイブリダイゼ-ション法で検討した。この結果オリゴヌクレオチドは、クロ-ン化DNAの端200bpと相同性があることが判明した。そこでこのフラグメント周辺のDNA塩基配列をダイデオキシ法で決定した結果、DNA挿入断片の端から130bp付近にプロ-ブと相補的な塩基配列が存在することがわかった。また塩基配列から推定されるこの前後のアミノ酸配列はさきに精製した酵素のアミノ酸配列と一致し、クロ-ン化されたDNAフラグメントは亜硝酸還元酵素遺伝子に相違ないことが確認された。2.クロ-ン化した亜硝酸還元酵素遺伝子を<trp>___ーおよび<lacZ>___ープロモ-タ-を含む発現ベクタ-に連結し大腸菌に導入した後、ウエスタンブロッティングにより目的遺伝子産物の発現を検出した。その結果、亜硝酸還元酵素抗原のみかけの分子量は約5万であった。活性型亜硝酸還元酵素の分子量は7万であるので、クロ-ン化したDNAフラグメントは酵素全体の約2/3を含んでいると考えられる。また決定したDNA塩基配列から推定されるアミノ酸配列からこの亜硝酸還元酵素抗原は活性型のN末端側が欠如していると考えられ、本酵素の構造遺伝子は、11.5kb <Hind>___ーIIIフラグメント内の4kbp程度の領域に含まれていると推定された。上記実験全般にわたりプラスミドDNAの大量調整はカゴ型攪拌リアクタ-(培養槽)を使用した。

1. Previous year's にクロ-ン化した亜nitric acid reduction enzyme remaining 伝子をcontaining むと卡えられる11.5kbp <Hind>___ーIIIフラグメントをサブクロ-ン化し、Detailed enzyme restriction enzyme production system.クロ-ニングに uses したオリゴヌクレオチドとクロ-ン化したDNAフラグメントの Sameness をサザンハイブリダイゼ-ション法で検多した. As a result, the identity of 200 bp at the end of オリゴヌクレオチドは and クロ-ンDNA was determined and the identity was determined.そこでこのフラグメントweek 辺のDNA base arrangement をダイデオキシ法でdeterminationした results, DNA insertion At the end of the fragment, there is a 130bp close にプロ-ブと complementary Nashi base arrangement. The また塩base arrangement is estimated, the されるこのfront and rear のアミノacid arrangement is the same, the refined したenzyme のアミノacid arrangement is the sameし、クロ-ン化されたDNAフラグメントは亜 nitrate reducing enzyme legacy 伝子に ないことがconfirmationされた. 2.クロ-ン化した亜nitric acid reduction enzyme 缝子を<trp>___ーおよび<lacZ>___ープロモ-タ-をContains After the coliform-linked coliform was introduced into the product, the remaining product of the ウエスタンブロッグにより purpose was released. As a result, the molecular weight of the nitrate reducing enzyme antigen is about 50,000. Active type of anhydrous nitrate reducing enzyme, molecular weight: 70,000, であるので, クロ-ン化したD Approximately 2/3 of the total NA フラグメントは enzyme contains んでいると卡えられる.またdetermined DNA base alignment から presumed されるアミノ acid alignment からこの亜 nitrate reductase antigen The N-terminal side of the active type is undulated, and the structure of this enzyme is 11.5kb <Hind>___ーIII フラグメント内の4kbp degree の区 に ま れ て い る と ESTIMATE さ れ た. It is mentioned above that the general にわたりプラスミドDNAのlarge-scale adjustment and はカゴ-type stirring リアクタ-(culture tank) is used.

项目成果

Iijima S.: "Efficient induction of gene expression from <pho>___ー Promoter by using a membrane bioreactor" J.Fermentation and Bioengineering.

Iijima S.：“通过使用膜生物反应器从<pho>____启动子有效诱导基因表达”J.Fermentation and Bioengineering。