バキュロウイルスにおける長鎖非コードＲＮＡによる転写制御機構の解析

杆状病毒长链非编码RNA转录调控机制分析

• 批准号: 13J03128
• 负责人: 石原 玄基
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J03128/
• 关键词: バキュロウイルス; 長鎖非コードRNA; DNAウイルス; ウイルス増殖; 経口感染力; 転写制御; 経口感染; 組織特異性

本研究では、バキュロウイルスのゲノムから転写されている新しいクラスの長鎖非コードRNAのウイルス感染時における機能を解析し、厳密なウイルス遺伝子の転写制御における役割を明らかにすることを目的としている。そのために、バキュロウイルスゲノム由来の長鎖非コードRNAの機能解析を網羅的に実施した。手法としては、個々の非コード転写物に対してプロモーターノックアウトウイルス(PKOウイルス)を構築し、ウイルス遺伝子の発現制御と高次宿主制御との関連を調査することとした。組換えウイルスの作成は培養細胞における相同組換え法を用いて行い、現在までに22種のプロモーターノックアウトウイルスを構築した。次にプロモーターノックアウトウイルスの培養細胞、及びカイコ幼虫における性状を調査した。具体的には、感染細胞において発現している転写産物に対するNorthern解析、出芽ウイルス・多角体の産生量、及び、カイコ幼虫に対する病原性(半数致死時間、および半数致死量)を調査した。これまでに作成した22個のPKOウイルスの解析を行った結果、野生型ウイルスと比較して有意に多角体産生量が低下する１つのPKOウイルスと、経口感染力が消失する２つのPKOウイルスを見出した。これらの結果は、バキュロウイルスの長鎖非コードRNAが遺伝子発現制御や、病原性に影響を与えていることを示すものであった。続けて、それぞれの非コードRNAをコードする領域に対して詳細な解析を行った。その結果、野生型ウイルスと優位に表現型の異なった３つのPKOウイルスは、それぞれ異なった機構でウイルスの増殖・感染性に寄与している事が明らかとなった。得られた結果の一部は学会発表および、投稿論文にて発表した。

The purpose of this study is to analyze the function of long-locked non-terminal RNA when it is infected, and to clarify the function of long-locked non-terminal RNA when it is infected. The function analysis of long-locked non-terminal RNA is carried out in the following ways: Methods: To investigate the relationship between the generation control and higher-order host control of a non-female writing object and the construction of a female writing object. The same method was used to construct the cell culture system. Now, 22 kinds of cell culture systems were constructed. The next step is to investigate the characteristics of cultured cells and larvae. Specific Northern analysis, budding, polyhedrosis production, and pathogenicity (LD50, LD50) were investigated in response to the presence of the product in infected cells. The results of analysis of 22 PKO molecules were compared with those of wild-type PKO molecules, and it was found that the amount of intentional polyhedra produced was lower, and the infectivity of PKO molecules disappeared. These results demonstrate that the long-locked non-coding RNA of Baccarat can play a role in preventing gene discovery and affecting pathogenicity. A detailed analysis of the domain of non-RNA is provided. The result is that the wild type has the highest phenotype, and the PKO has the highest phenotype, and the infection has the highest phenotype. A part of the results of the study was published and submitted.

项目成果

「バキュロウイルスの経口感染に必須なアンチセンスRNAの機能解析」、

“口腔杆状病毒感染必需的反义RNA的功能分析”

• 发表时间: 2014
• 作者: 石原玄基;嶋田透;勝間進
• 通讯作者: 勝間進

バキュロウイルスにおける機能性長鎖非コードRNAの解析

杆状病毒功能性长非编码RNA分析

• 作者: Jouraku A;Yamamoto K;Kuwazaki S;Urio M;Suetsugu Y;Narukawa J;Miyamoto K;Kurita K,;石原玄基・嶋田透・勝間進
• 通讯作者: 石原玄基・嶋田透・勝間進

バキュロウイルス由来長鎖非コードRNAの機能解析

杆状病毒长链非编码RNA的功能分析

• 作者: Sakurai T;Mitsuno H;Mikami A;Uchino K;Tabuchi M;Zhang F;Sezutsu H;Kanzaki R;國生龍平・川本宗孝・嶋田透・勝間進;Yasuharu Takaku;瀬筒秀樹;石原玄基・嶋田透・勝間進
• 通讯作者: 石原玄基・嶋田透・勝間進