Biochemische Charakterisierung des pIP501-kodierten Transkriptionsrepressors CopR und Evolution des CopR-targets

转录抑制因子CopR （92 aa, 10.6 kD）是链链病毒质粒pIP501复制的调控因子之一。CopR reprimiert die转录本质上的repR-mRNA约10-20fach和verhindert konvergente转录正义和反义rna。CopR结合的不对称也形成了二聚体和zwei结合的不对称。研究了铜-二聚体和铜- dna -复合体在枯草芽孢杆菌中的浓度。Ein 3d - strukturmodel der ersten 63 Aminosäuren von CopR wurde konstruiert and zur Lokalisation des DNA- binding - motives/Identifizierung von Aminosäuren, die and der spezifischen und unspezifischen Erkennung der DNA beilingsind, sowie zur Grobeingrenzung der Dimerisierungsregion verwendet。蛋白水解的copr - c末端链的功能。Im Rahmen des geplanten Vorhabens sollen 1) die Evolution des CopR- ' targets ' mitteles SELEX-Verfahren untersut 2) der suppressionsmechanismus von CopR aufgeklärt, 3) die Konformationsveränderung von DNA and von CopR beindung von CopR and seinen Operator untersut 4) weitere Funktionen des sauren C-Terminus von CopR aufgeklärt和5)der individuelle Beitrag疏水剂Aminosäuren and der Dimerisierung von CopR beestimmt werden。

Der Transkriptionsrepressor CopR (92 aa, 10.6 kD) ist einer der beiden Regulatoren der Replikation des Streptokokkenplasmids pIP501. CopR reprimiert die Transkription der essentiellen repR-mRNA ca. 10-20fach und verhindert die konvergente Transkription von Sense- und Antisense-RNA. CopR bindet asymmetrisch als vorgeformtes Dimer an zwei Bindungsorten in der großen Furche der DNA. Die Gleichgewichtsdissoziationskonstanten für die CopR-Dimere und den CopR-DNA-Komplex sowie die intrazelluläre Konzentration in B. subtilis wurden bestimmt. Ein 3D-Strukturmodell der ersten 63 Aminosäuren von CopR wurde konstruiert und zur Lokalisation des DNA-Bindungsmotives/Identifizierung von Aminosäuren, die an der spezifischen und unspezifischen Erkennung der DNA beteiligt sind, sowie zur Grobeingrenzung der Dimerisierungsregion verwendet. Eine Funktion des CopR-C-Terminus ist der Schutz vor Proteolyse. Im Rahmen des geplanten Vorhabens sollen 1) die Evolution des CopR-`targets`mittels SELEX-Verfahren untersucht 2) der Repressionsmechanismus von CopR aufgeklärt, 3) die Konformationsveränderung von DNA und CopR bei Bindung von CopR an seinen Operator untersucht 4) weitere Funktionen des sauren C-Terminus von CopR aufgeklärt und 5) der individuelle Beitrag hydrophober Aminosäuren an der Dimerisierung von CopR bestimmt werden.