Der molekulare GTPase-Mechanismus von H-ras p21 bestimmt mit zeitaufgelöster FTIR-Spektroskopie

完成Röntgenstrukturanalysen soll zum Verständnis des molekularen GTP-bindender Proteine am Beispiel des Ras mit zeitaufgelöster FTIR- Spektroskopie beigetragen韦尔登光谱。通过对我们新建立的方法的帮助，我们发现，β-磷酸盐对GTP结合和Ras阴性的影响是韦尔登引起的。由于GTP在经济学中的地位是韦尔登，因此，它与GDP生产率的关系密切，因此，GTP/GDP的自由活动可以通过对GTP/GDP比值的分析来确定，并通过对GTP反应的分析来确定。DAPGAP-Bindung将使该效果更加明显。在进一步的研究中，可以将Lys-16和高浓度的“P-Loop”酶解“Arg-Finger”，并将其用于b-磷酸盐的工业化生产。因此，必须使用同位素标记氨基韦尔登。我们知道，在GAP-催化反应中，游离的无机磷酸盐中间体和蛋白质复合物将结合在一起，并在一定程度上使磷酸盐游离。在最后的工作中，我们将韦尔登，在RasGAP蛋白复合物的磷酸化中间体中工作。这是一个实验性的证明，证明GTP与蛋白质的结合是韦尔登的结合。因此，Ras-Raf-Kinase相互作用可被韦尔登。

Komplementär zu den Röntgenstrukturanalysen soll zum Verständnis des molekularen Reaktionsmechanismus GTP-bindender Proteine am Beispiel des Ras mit zeitaufgelöster FTIR- Spektroskopie beigetragen werden. Mit Hilfe des von uns neu etablierten methodischen Ansatzes konnte gezeigt werden, dass die GTP-Bindung an Ras negative Ladungen von g- nach b-Phosphat verschiebt. Da die Ladungen bereits in GTP in dieselbe Richtung verschoben werden, wie später beim dissoziativem Übergangszustand und GDP Produktzustand, scheint diese Ladungsverschiebung die freie Aktivierungsenthalpie für den GTP/GDP Übergang zu erniedrigen und somit zur Katalyse der GTPase Reaktion beizutragen. Durch GAP-Bindung wird dieser Effekt noch erheblich verstärkt. In künftigen Arbeiten soll untersucht werden, ob neben dem katalytischen "Arg-Finger" auch Lys-16 und der hoch konservierte "P-Loop" diese Ladungsverschiebung nach b-Phosphat induzieren. Zur Zuordnung sollen insbesondere isotopenmarkierte Aminosäuren eingesetzt werden. Wir konnten weiterhin nachweisen, dass bei der GAP-katalysierten Reaktion das freigesetzte anorganische Phosphat intermediär an den Proteinkomplex gebunden wird und somit die Phosphatfreisetzung der geschwindigkeitsbestimmende Schritt ist. In künftigen Arbeiten soll bestimmt werden, ob dabei in dem Intermediat der RasGAP Proteinkomplexes phosphoryliert wird. Weiterhin soll der experimentelle Ansatz auf andere GTP bindende Proteine übertragen werden. Zudem soll die Ras-Raf-Kinase Interaktion untersucht werden.