Molekulare Mechanismen der Hepatitis C Virus-Infektion von Wirtszellen: Analyse Mittels rekombinanter HCV-E1-E2-Dengue Virus Konstrukten

这是一个很好的项目，它的分子机制是通过丙型肝炎病毒的产生、结合和基因表达来理解的。在我们的研究中，我们知道最初的结合是由登革病毒，一种HCV结构和黄病毒，一种由硫酸乙酰肝素-蛋白聚糖组成的肝酶，以及一种“包被的坑”--一种体内酶促反应机制。这种对HCV最有效的治疗方法是通过感染HCV的E1-E2-Oberflächenproteine来抑制DEN中的Oberflächenproteine。第一个实验是，这种嵌合病毒在细胞培养中复制，并由病毒分离物合成。但是，由于HCV的局限性仍然存在于没有任何病毒感染的Zellkultursystem中，因此所有的病毒感染都是韦尔登感染。第二代HCV感染者的HCV感染系统不适合生产和感染病毒。通过对丙型肝炎病毒感染的黄病毒的结构和生物学特征的详细分析，可确定肝细胞膜结合物韦尔登性。配体-印迹-分析和筛选一种肝细胞表达-Genbibliothek mit radioaktiv merkierten Virus partikeln sind die methodischen ansatz zur Realisierung dieses Vorhabens.特异性的病毒内分泌定量测定和分析验证了使用激光韦尔登的内体细胞碎片，这是一种非常有效的方法，可以检测HCV-DEN-黄病毒嵌合体的初始感染。

Ziel des beantragten Projektes ist es, die molekularen Mechanismen zu verstehen, durch die das Hepatitis C-Virus seine Wirtszellen erkennt, bindet und in diese Zellen aufgenommen wird. Im Rahmen unserer Vorarbeiten konnten wir zeigen, dass die initiale Bindung von Dengue Virus, einem dem HCV strukturell eng verwandten Flavivirus, an Hepatozyten über Heparansulfat-Proteoglykane vermittelt wird und von einem 'coated pit'-abhängigen endozytotischen Internalisierungsmechanismus gefolgt ist. Um diese Ergebnisse für HCV zu bestätigen, wurde ein chimärer Flavivirus konstruiert und kloniert, in welchem die Oberflächenproteine von DEN durch die E1-E2-Oberflächenproteine von HCV ersetzt wurden. Erste Ergebnisse zeigen, dass dieser chimäre Virus in Zellkultur repliziert und es zur Synthese von Viruspartikeln kommt. Damit wurde die Limitation umgangen, dass es für HCV immer noch kein Zellkultursystem gibt, mit dem alle Schritte der Virusinfektion untersucht werden können. Selbst die HCV-Replikonsysteme der zweiten Generation führen bisher nicht zur Produktion und Freisetzung von infektiösen Viruspartikeln. Nach einer detaillierten Analyse der strukturellen und biologischen Eigenschaften des chimären HCV-DEN Flavivirus soll dieser als Werkzeug zur Identifizierung HCV-bindender hepatozellulärer Membranmoleküle genutzt werden. Liganden-Blot-Analysen und Screening einer hepatozellulären Expressions-Genbibliothek mit radioaktiv merkierten Viruspartikeln sind die methodischen ansätze zur Realisierung dieses Vorhabens. Speziell entwickelte Assays zur Quantifizierung viraler Internalisierung und die Analyse verschiedener endosomaler Fraktionen mittels konfokaler Lasermikroskopie werden es dann ermöglichen, die Abfolge der initialen Infektionsschritte des chimären HCV-DEN-Flavivirus zu beschreiben.