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Die Rolle der Transkriptionsregulator-Familie TrmB bei der Regulation des Kohlenhydrat-Stoffwechsels in Pyrococcus furiosus

转录调节因子TrmB家族在火球菌碳水化合物代谢调节中的作用

基本信息

批准号：
156019105
负责人：
Professor Dr. Michael Thomm
金额：
--
依托单位：
Lehrstuhl für Mikrobiologie und Archaeenzentrum
依托单位国家：
德国
项目类别：
Research Grants
财政年份：
2009
资助国家：
德国
起止时间：
2008-12-31 至 2013-12-31
项目状态：
已结题

来源：
https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/156019105?language=en
关键词：
Die Rolle der Transkriptionsregulator Familie

项目摘要

Im Rahmen dieses Projektes soll schwerpunktmäßig die Rolle von zwei der insgesamt vier Proteine umfassenden Transkriptionsregulator-Familie TrmB im Zusammenhang mit der Regulation des Kohlenhydrat-Stoffwechsels in Pyrococcus furiosus genauer analysiert werden. Anhand von ChIP-Seq Experimenten sollen die Bindestellen der Regulatoren im Genom ermittelt bzw. bestätigt werden. Auf der Basis eines in unserem Labor entwickelten Plasmid-basierten Transformationssystems soll ein genetisches System für Pyrococcus furiosus aufgebaut werden. Mit Hilfe dieses Systems sollen Deletionsmutanten von diesen Regulatoren erstellt und der Phänotyp der Mutanten auf RNA- bzw. Proteinebene analysiert werden. Diese Untersuchungen werden durch in vitro Transkriptionsexperimente und Analysen zum Nachweis von DNA-Protein-Wechselwirkungen ergänzt werden. Durch die Kombination dieser in vivo und in vitro Versuche wird die bisher unbekannte Funktion des in allen Pyrococcus Arten hochkonservierten Regulators, TrmBL2, entschlüsselt werden. Mit einem ähnlichen experimentellen Ansatz soll auch die Aufgabe des zweiten Regulators, TrmBL1, bei der Kontrolle zwischen Glycolyse und Gluconeogenese aufgeklärt werden. Außerdem zeigen die bisherigen Untersuchungen, dass TrmB oder auch TrmBL1 in Abhängigkeit von den gebundenen Zielsequenzen unterschiedlich auf verschiedene Induktoren bzw. Corepressoren reagieren können. Da bisher nicht bekannt ist, welche molekularen Besonderheiten für dieses Phänomen verantwortlich sind, wird dies durch Analyse der Wirkung von Mutationen auf Protein- bzw. DNA-Ebene näher untersucht werden.

本研究旨在通过对激烈火球菌中的Kohlenhydrat-Stoffwechsels的调节，对两种不同的蛋白质在转化调节因子-TrmB家族中的作用进行分析。ChIP-Seq实验解决了基因组调控的结合问题。最好的韦尔登。在我们的实验基础上，构建了一个基于质粒的转化系统，该系统是韦尔登的遗传学系统。Mit Hilfe的系统解决了RNA- bzw突变体的缺失和突变类型的调控。蛋白质成分分析韦尔登。这些研究通过体外转录实验和DNA-蛋白质-酶联免疫吸附试验分析来进行。通过体内和体外的联合试验，证明了艾伦热球菌高服务性调节因子TrmBL 2在体内的作用是不可忽视的，TrmBL 2可以使韦尔登生长。通过一项实验证实，在控制糖酵解和葡萄糖异生韦尔登的过程中，两种调节因子TrmBL 1也会增加。因此，我们可以将TrmB或TrmBL 1安装在可用于工业生产的通用Zielsequenzen设备上。心脏抑制剂反应快。但这并不意味着，这些现象的分子基础是正确的，这将通过蛋白质突变的分子分析来实现。DNA-能让我们找到韦尔登。