Mechanismus der Transkription bei Archaea

古细菌的转录机制

• 批准号: 5085902
• 负责人: Professor Dr. Michael Thomm
• 金额: --
• 依托单位: Lehrstuhl für Mikrobiologie und Archaeenzentrum
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 1997-12-31 至 2001-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5085902?language=en
• 关键词: Mechanismus; der; Transkription; bei; Archaea

Der Übergang von Initiation zur Elongation der archaeellen Transkription soll mit Hilfe eines zell-freien Transkriptionssystems von Pyrococcus untersucht werden. Dazu werden Transkriptionskomplexe mit naszierender RNA in verschiedenen Registern der Transkription pausiert und die Translokation der Transkriptionsblase sowie die Protein-DNA-Wechselwirkungen mit verschiedenen footprinting Methoden untersucht. Das Schicksal der Transkriptionsfaktoren nach der Initiation wird durch Matrizenkompetitionsexperimente und immunologische Detektion der Faktoren in isolierten Transkriptionskomplexen analysiert. Die RNA Polymerase Untereinheiten, die mit den Transkriptionsfaktoren TFB (und TBP) interagieren, sowie die Interaktionsdomäne der faktorbindenden Untereinheiten wird durch die far-WesternTechnik und das yeast-two-hybrid-system identifiziert.

古细菌的伸长起始需要一种无菌的转化系统，该系统来源于热球菌（Pyrococcus untersucht韦尔登）。本文介绍了韦尔登在弱转录注册中用RNA进行转录复合物的制备，并采用蛋白质-DNA-Wechselfingerprint法进行转录因子的翻译。通过基质竞争实验和免疫学检测，在孤立的跨膜复合物分析中获得启动后跨膜因子的筛选。RNA聚合酶与转录因子TFB（和TBP）的相互作用，可以通过远西方技术和酵母双杂交系统鉴定。