New Synthetic Methods for Glycoproteins and the Integrated Approaches to Elucidate the Functions of Post-translational Modifications

ヒトのSPINK13という抗がん作用を示す糖タンパク質の合成を試みた。SPINK13はPro-Asn(Glycan)-Val-Thrという非常に嵩高いアミノ酸の間に糖鎖アスパラギンを持っているが、H2N-Asn(Glycan)COSHから5工程でフォールディングした天然型のSPINK13を合成することに成功した。また、抗がん作用を調べたところ、糖鎖がないSPINK13が正常細胞への癌細胞の浸潤を阻害することが明らかとなった。昨年度までに確立したβSHアミノ酸を合成する方法を利用し、アルギニン、リジン、ヒスチジン、トリプトファンの合成、及びキラルカラムによる光学分割に成功した。また、PdによるCH活性化法をもとにγ位にチオールをもつイソロイシン、バリン、トレオニンの合成も確立した。糖鎖をもつ合成EPOおよび、大腸菌で発現し、高度に精製したEPOと、市販のEPOのレセプターとの結合親和力を表面プラズモン共鳴法(SPR)で調べた。その結果、糖鎖化EPOの方が僅かに親和力が高いことが明らかになった。次に糖鎖と水の相互作用を、NMRを用いて調べたところ、NOEが強く観測されたことから、糖鎖構造特異的な水和の生成が示唆された。また、新規なNMR測定法で、糖鎖と水の相互作用を追跡する方法を確立した。糖タンパク質ICOSの膜貫通部分に相当するペプチド配列を、故意に糖鎖付加したスプリットInteinBと連結させたペプチド（InteinB-ICOS）を細胞表層に発現することに成功した。そして、糖鎖化InteinB-ICOSを細胞に発現後、細胞を均一液化した溶液中でProteinA-InteinAを加え、ProteinA-ProteinBが得られることを確認した。現在、合成した糖タンパク質ICOSをinteinAを利用して導入することを検討している。

ヒトのSPINK13という抗がん作用を示す糖タンパク質の合成を試みた。SPINK13はPro-Asn(Glycan)-Val-Thrという非常に嵩高いアミノ酸の間に糖鎖アスパラギンを持っているが、H2N-Asn(Glycan)COSHから5工程でフォールディングした天然型のSPINK13を合成することに成功した。また、抗がん作用を調べたところ、糖鎖がないSPINK13が正常細胞への癌細胞の浸潤を阻害することが明らかとなった。昨年度までに確立したβSHアミノ酸を合成する方法を利用し、アルギニン、リジン、ヒスチジン、トリプトファンの合成、及びキラルカラムによる光学分割に成功した。また、PdによるCH活性化法をもとにγ位にチオールをもつイソロイシン、バリン、トレオニンの合成も確立した。糖鎖をもつ合成EPOおよび、大腸菌で発現し、高度に精製したEPOと、市販のEPOのレセプターとの結合親和力を表面プラズモン共鳴法(SPR)で調べた。その結果、糖鎖化EPOの方が僅かに親和力が高いことが明らかになった。次に糖鎖と水の相互作用を、NMRを用いて調べたところ、NOEが強く観測されたことから、糖鎖構造特異的な水和の生成が示唆された。また、新規なNMR測定法で、糖鎖と水の相互作用を追跡する方法を確立した。糖タンパク質ICOSの膜貫通部分に相当するペプチド配列を、故意に糖鎖付加したスプリットInteinBと連結させたペプチド（InteinB-ICOS）を細胞表層に発現することに成功した。そして、糖鎖化InteinB-ICOSを細胞に発現後、細胞を均一液化した溶液中でProteinA-InteinAを加え、ProteinA-ProteinBが得られることを確認した。現在、合成した糖タンパク質ICOSをinteinAを利用して導入することを検討している。