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New Synthetic Methods for Glycoproteins and the Integrated Approaches to Elucidate the Functions of Post-translational Modifications

糖蛋白的新合成方法和阐明翻译后修饰功能的综合方法

基本信息

批准号：
21H05028
负责人：
梶原康宏
金额：
$ 121.39万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (S)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-07-05 至 2026-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

ヒトのSPINK13という抗がん作用を示す糖タンパク質の合成を試みた。SPINK13はPro-Asn(Glycan)-Val-Thrという非常に嵩高いアミノ酸の間に糖鎖アスパラギンを持っているが、H2N-Asn(Glycan)COSHから5工程でフォールディングした天然型のSPINK13を合成することに成功した。また、抗がん作用を調べたところ、糖鎖がないSPINK13が正常細胞への癌細胞の浸潤を阻害することが明らかとなった。昨年度までに確立したβSHアミノ酸を合成する方法を利用し、アルギニン、リジン、ヒスチジン、トリプトファンの合成、及びキラルカラムによる光学分割に成功した。また、PdによるCH活性化法をもとにγ位にチオールをもつイソロイシン、バリン、トレオニンの合成も確立した。糖鎖をもつ合成EPOおよび、大腸菌で発現し、高度に精製したEPOと、市販のEPOのレセプターとの結合親和力を表面プラズモン共鳴法(SPR)で調べた。その結果、糖鎖化EPOの方が僅かに親和力が高いことが明らかになった。次に糖鎖と水の相互作用を、NMRを用いて調べたところ、NOEが強く観測されたことから、糖鎖構造特異的な水和の生成が示唆された。また、新規なNMR測定法で、糖鎖と水の相互作用を追跡する方法を確立した。糖タンパク質ICOSの膜貫通部分に相当するペプチド配列を、故意に糖鎖付加したスプリットInteinBと連結させたペプチド（InteinB-ICOS）を細胞表層に発現することに成功した。そして、糖鎖化InteinB-ICOSを細胞に発現後、細胞を均一液化した溶液中でProteinA-InteinAを加え、ProteinA-ProteinBが得られることを確認した。現在、合成した糖タンパク質ICOSをinteinAを利用して導入することを検討している。

The anti-tumor effect of SPINK13 showed that the synthesis of glucose was not effective. SPINK13, Pro-Asn (Glycan)-Val-Thr, which is very high in quality, has been successfully synthesized by H2N-Asn (Glycan) COSH and 5 engineering projects. The effects of anti-tumor, anti-tumor, normal cell, cancer cell, tumor cell, anti-tumor cell, Last year, we made sure that the β-SHG acid synthesis method was successful in optical segmentation by using the following methods: the synthesis of β-SHG, β-SHG and so on. The method of activation of Pd, Pd, and CH was used to synthesize a stable compound. The synthesis of EPO by glucose, the detection of mycelium, the detection of EPO, the combination of glucose synthesis and EPO synthesis, the detection of bacteria, the detection of EPO, the combination of glucose and glucose, the detection of mycelium, the detection of mycelium, the combination of glucose and glucose, the detection of mycelium, the combination of glucose and glucose, the detection of mycelium, the detection of mycelium, the combination of glucose and glucose, the detection of mycelium, the detection of mycelium, the combination of glucose and glucose, the detection of mycelium, the detection of mycelium, the combination of glucose and glucose, the combination of glucose and glucose, the detection of mycelium, the detection of mycelium, the combination of glucose and glucose, the combination of glucose and glucose, the detection of mycelium, the Compare the results, saccharify the EPO prescription and improve the accuracy of the results. The interaction between sugar and water, the use of NMR, the stress of NOE, the creation of special water and the generation of sugar. The new standard NMR method and the glucose-water interaction method confirm the accuracy of the method. The connection part of the ICOS membrane is quite different, and the link between the sugar and the InteinB is intentional. The cell table shows that the cell is successful. After heating and saccharification of InteinB-ICOS, the cells were homogenized and ProteinA-InteinA was added to the solution, and ProteinA-ProteinB was added to the solution. Now, synthesize sugar, sugar, ICOS, inteinA, sugar, sugar, sugar and inteinA.