安定同位体で標識された糖アナログを有する糖タンパク質糖鎖アナログの合成

用稳定同位素标记的糖类似物合成糖蛋白碳水化合物类似物

• 批准号: 09780531
• 负责人: 梶原 康宏
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780531/
• 关键词: シアル酸誘導体; 糖鎖; ガラクトース; シアル酸転移酵素; 糖タンパク質; ガラクトース転移酵素; シアリルオリゴ糖誘導体

本研究では、化学修飾を施した[3-^<13>C]-シアル酸誘導体を糖タンパク質の糖鎖末端に組み込み、その立体配座をNMRで解析することを検討した。まず、9-デオキシ-9-フルオロ-シアル酸誘導体を原料として、アルドラーゼ、乳酸脱水素酵素、アルコール脱水素酵素、ヌクレオチドピロリン酸加水分解酵素という4つの酵素を用いて、6-デオキシ-6-フルオロ-マンノサミンへ変換後、[3-^<13>C]-ピルビン酸と縮合させるワンポット反応により[3-^<13>C]-シアル酸誘導体の簡便な合成法を見出した。そして得られた[3-^<13>C]-シアル酸誘導体、および市販の[u-^<13>C]-グルコースをそれぞれ糖ヌクレオチド化後、シアル酸転移酵素、ガラクトース転移酵素(UDP-ガラクトース-4-エピメラーゼを併用)を用いてオブアルブミン上の糖鎖の非還元末端のN-アセチル-グルコサミンに順次転移させて、[3-^<13>C]-9-デオキシ-9-フルオロ-シアル酸-α-(2-6)[U-^<13>C]-ガラクトース-β-(1-4)-N-アセチル-グルコサミンを有する糖蛋白質を得た。そして、核磁気共鳴装置をもちいてシアリルガラクトシド誘導体の構造解析を行った。その結果、^<13>CNMRデータより、[3-^<13>C]-9-フルオロ-シアル酸は[U-13C]-ガラクトースの6位に結合していることが確認できた。さらに、NOEを測定することでガラクトースの6位ヒドロキシメチル基は、gt-orientationをとっていること、およびガラクトースはβ結合でN-アセチル-グルコサミンの4位へ結合していることを確認した。そして、これらのデータをシアリルガラクトシド単独のデータと比較した。その結果、タンパク上のシアリルガラクトシドの立体配座はシアリルガラクトシド単独の場合と同じ様な立体配座をとっていることを見い出した。

In this study, we investigated the chemical modification of [3-^<13>C]-hydroxy acid elicitor, the formation of sugar chain termini, and the NMR analysis of stereoligands. A simple method for the synthesis of [3-^C]-hydroxy-acid elicitor has been developed by using 4 enzymes, 6-^C<13>]-hydroxy-acid elicitor and condensation of [3-^C]-<13>hydroxy-acid elicitor. [3-^<13>C]-serine inducer,[u-^ C]-serine inhibitor,[u-^<13>C]-serine inhibitor,[u-3-serine inhibitor,[u-^ C]-3-serine inhibitor,[u-3 - 3 - 3-serine inhibitor,[u-4 - 4 - 4 (UDP-<13>4-[3-^ C]-9--9--α-(2-6)[U-^<13>C]--β-(1-4)-N- The structural analysis of the induced body was carried out by using nuclear magnetic resonance (NMR). Results,^<13>CNMR data,[3-^<13>C]-9-fluorine-sulphoacid [U-13C]-fluorine-sulphoacid 6-bit binding,[3-^ C]-9-fluorine-sulphoacid The NOE is determined by determining whether the 6-bit base of the GT-orientation, the GT-orientation, and the 4-bit base of the β-junction are N-bit-base or 4-bit base. In addition to the above, the company also has the ability to provide a variety of services. The result is that the three dimensional coordinates of the three dimensional coordinates of the

项目成果

宮崎達雄: "Chemoenzymatic synthesis of the 9-deoxy-9-fluoro-[3-^<13>C]-NeuAc-α-(2-6)-[U-^<13>C]-Gal-β-sequence on an intact glycoprotein" Journal of the American Chemical Society. 121・6. 1411-1412 (1999)

Tatsuo Miyazaki：“9-脱氧-9-氟-[3-^<13>C]-NeuAc-α-(2-6)-[U-^<13>C]-Gal-β-的化学酶合成完整糖蛋白的序列”美国化学会杂志。121・6.1411-1412（1999）