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化学法と酵素法を利用したアスパラギン結合型複合糖鎖誘導体の合成とその機能解析

化学和酶法合成天冬酰胺连接的复杂糖链衍生物及其功能分析

基本信息

批准号：
11780422
负责人：
梶原康宏
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、糖タンパク質から糖鎖のみを単離後、非還元末端に存在するシアル酸を糖加水分解酵素で除去し、化学的に合成しておいたシアル酸誘導体を糖転移酵素により組み込みなおし、アスパラギンに結合した分岐型の複合型糖鎖(N-結合型糖鎖)誘導体の簡便な合成法の確立をめざした。プロナーゼ処理により得られたアスパラギン結合型2分岐糖鎖を精製した。そして、糖鎖の末端のシアル酸が結合していたり、あるいはいなかったりという不均一な構造をシアル酸加水分解酵素で処理することで単一構造のアシアロ糖鎖誘導体を効率良く得ることができた。そして、この糖鎖の末端にシアル酸誘導体をシアル酸転移酵素で導入し、アスパラギン結合型2分岐糖鎖誘導体の合成を検討した。まず、導入するシアル酸誘導体の化学合成を行い、シアル酸の各水酸基が、デオキシ化されたもの、フッ素委化されたもの、保護基が導入された誘導体を合成した。そして、これらシアル酸誘導体をシアル酸転移酵素をもちいて、糖鎖の非還元末端へ導入することを検討した。その結果、シアル酸の側鎖を修飾したデオキシ糖を初めとする各種誘導体は、全て糖鎖の非還元末端へ転移でることが判明した。一方、シアル酸の4位修飾体は、転移反応を示すもののその効率は低いことが判明した。そして、実際に生成物を単離し、その構造を核磁気共鳴法、質量分析により決定した。糖鎖の末端のシアル酸は、細胞間の相互作用に関与する重要な糖鎖である。この糖鎖の機能を調べる為の糖鎖誘導体を化学法と酵素法を組み合わせ、従来の化学法で得られる糖鎖誘導体よりも簡便にかつ大量に合成する手法を確立することができた。また、得られたシアリル糖鎖誘導体の3次元構造を核磁気共鳴法により解析するために、安定同位体で標識された各種シアル酸誘導体の合成および、糖鎖への導入法も確立することができた。

In this study, we established a simple method for the synthesis of N-linked complex glycocks (N-linked glycocks) inducers, which are composed of glycocks isolated from their non-reducing termini, and glycocalytic enzymes removed from them by chemical synthesis. The process of purification is carried out by combining two different sugar chains. The enzyme treatment of the glycophosphate in a heterogeneous structure is very efficient. The introduction of the terminal allelic acid inducer of the glycan and the synthesis of the 2-branched glycan inducer are discussed. The chemical synthesis of the amino acid inducer, the amino acid inducer, the amino acid inducer and the amino acid inducer was carried out. In this paper, we discuss how to introduce the enzyme of enzyme shift and the non-reducing terminal of carbohydrate into the cell. As a result, the modification of the side chain of the acid and the shift of the non-reducing terminal of the sugar chain of the various inducers were identified The 4-position modifier of a single nucleotide sequence was found to have a low conversion rate. In fact, the product separation, structural nuclear magnetic resonance, mass analysis and determination The terminal amino acids of the glycogen chain are important for cell-cell interactions. The function of the sugar lock is regulated by chemical methods, enzyme methods, and chemical methods to obtain the sugar lock inducer. 3-D structure analysis of carbohydrate inducer by NMR, identification of stable isotope, synthesis of carbohydrate inducer and establishment of carbohydrate inducer by NMR