化学法と酵素法を利用したアスパラギン結合型複合糖鎖誘導体の合成とその機能解析

化学和酶法合成天冬酰胺连接的复杂糖链衍生物及其功能分析

• 批准号: 11780422
• 负责人: 梶原 康宏
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11780422/
• 关键词: 糖鎖; シアル酸; 糖転移酵素; 複合型糖鎖; シアル酸転移酵素; デオキシーシアル酸; 糖タンパク質

本研究では、糖タンパク質から糖鎖のみを単離後、非還元末端に存在するシアル酸を糖加水分解酵素で除去し、化学的に合成しておいたシアル酸誘導体を糖転移酵素により組み込みなおし、アスパラギンに結合した分岐型の複合型糖鎖(N-結合型糖鎖)誘導体の簡便な合成法の確立をめざした。プロナーゼ処理により得られたアスパラギン結合型2分岐糖鎖を精製した。そして、糖鎖の末端のシアル酸が結合していたり、あるいはいなかったりという不均一な構造をシアル酸加水分解酵素で処理することで単一構造のアシアロ糖鎖誘導体を効率良く得ることができた。そして、この糖鎖の末端にシアル酸誘導体をシアル酸転移酵素で導入し、アスパラギン結合型2分岐糖鎖誘導体の合成を検討した。まず、導入するシアル酸誘導体の化学合成を行い、シアル酸の各水酸基が、デオキシ化されたもの、フッ素委化されたもの、保護基が導入された誘導体を合成した。そして、これらシアル酸誘導体をシアル酸転移酵素をもちいて、糖鎖の非還元末端へ導入することを検討した。その結果、シアル酸の側鎖を修飾したデオキシ糖を初めとする各種誘導体は、全て糖鎖の非還元末端へ転移でることが判明した。一方、シアル酸の4位修飾体は、転移反応を示すもののその効率は低いことが判明した。そして、実際に生成物を単離し、その構造を核磁気共鳴法、質量分析により決定した。糖鎖の末端のシアル酸は、細胞間の相互作用に関与する重要な糖鎖である。この糖鎖の機能を調べる為の糖鎖誘導体を化学法と酵素法を組み合わせ、従来の化学法で得られる糖鎖誘導体よりも簡便にかつ大量に合成する手法を確立することができた。また、得られたシアリル糖鎖誘導体の3次元構造を核磁気共鳴法により解析するために、安定同位体で標識された各種シアル酸誘導体の合成および、糖鎖への導入法も確立することができた。

In this study, after the treatment of sugar, sugar, acid, acid, hydrolytic enzyme removal, chemical synthesis, glucose transfer enzyme, glycosyltransferase, gly The method of synthesis of bifurcated complex glycosides (N-combined glycosides) was confirmed by the method of synthesis of bifurcated glycosides. This is the best way to get a good result. The combined type of 2-point sugar is very good. The results show that the concentration of acid in the end of the glucose is higher than that of the control, and the results show that the acid and water-decomposing enzymes are not uniform. in this paper, the results of the combination of the acid and the acid at the end of the glucose are analyzed. In the end of the sugar, the acid transfer enzyme was added, and the combination of 2-component glucose was synthesized by the combination of 2-component glucose. Chemical synthesis, chemical synthesis and chemical synthesis. The acid transfer enzyme, the carbohydrate, the non-enzyme end, the acid, the acid, the enzyme, the acid, the acid The results are as follows: the results of the test, the results, the results and the results. On the one hand, the four-position repair body and reverse movement show that the rate is low and the diagnosis is clear. The products are isolated, the nuclear magnetic resonance method is established, and the quantitative analysis method is used to determine the quality of products. The end of glucose is sensitive to carboxylic acid, intercellular interaction, and critical glucose. The chemical method and the chemical method can be used to determine the temperature of the sugar compound. the chemical method, the enzyme method, the enzyme method, the chemical method, the enzyme method and the chemical method. The three-dimensional method of nuclear magnetic resonance (NMR) is used to analyze the chemical composition of all kinds of carboxylic acid compounds, and to make sure that all kinds of sugar compounds are synthesized by the method of nuclear magnetic resonance.

项目成果

宮崎達雄: "An Approach to the Precise Chemoenzymatic Synthesis of^<13> C-Labeled Sialyloligosaccharide on an Intact Glycoprotein"Journal of the American Chemical Society. (印刷予定).

Tatsuo Miyazaki：“在完整糖蛋白上精确化学酶合成^ 13 C标记唾液酸寡糖的方法”美国化学会杂志（待印刷）。

宮崎達雄: "Precise chemoenzymatic Synthesis of ^<13>C-Labeled sialyloligosaccharide on an Intact Glycoprotein"Journal of American Chemical Society. 122(24). 5678-5694 (2000)

Tatsuo Miyazaki：“在完整糖蛋白上精确化学酶合成^ 13 C标记的唾液酸寡糖”美国化学学会杂志122(24)(2000)。