Establishment of model animals for analyzing collagen in three-dimensional construction, tissue maintenance and fibrosis

第１世代HaloTagマウスを応用した、成長過程の解析と線維症のin vivo解析（R3年度）として、すでに樹立がかなり進行している第１世代HaloTagマウスは、好きなタイミングで好きな色のHaloTag ligandを投与し共有結合により不可逆的にコラーゲンを染色できる。ホモマウスはプローブ化V型コラーゲンのみを発現するため、その性質を解析した。ヘテロマウスの交配による出産数が完全にメンデルの法則に従うことから、HaloTagマウスは問題なく生存できることが示唆された。またホモマウス同士の交配も問題なく出産し、成長期の体重が野生型と全く同等であり、コラーゲン異常によく見られる表現型が全く観察されなかった。以上のことから、我々の技術でコラーゲン線維の機能が完全に維持できていることを証明した。次に、イメージングを実施するために、生きたマウスへのHaloTag ligand投与と、摘出した臓器の染色法の２つの方法を検討し、いずれも適切な条件を設定し、イメージングを実施可能となった。胎仔をライトシート顕微鏡で３次元撮影することにより、成長期のコラーゲン産生の全体像を明らかにすることができた。また成体において、一般にコラーゲンが多いと考えられている組織で蛍光輝度が高かった。また肝炎誘導マウスにおいて、肝臓で高輝度の蛍光が検出された。以上のことより、我々の技術でコラーゲン線維の機能が完全に維持できていることを証明することができた。また、テーマ４のin vitroでの解析に関して、コラーゲンの構造的特徴を偏光を用いて光学的に非常に簡便に解析できる新しい手法の開発に成功した。さらに、リアルタイムに継続して動画として捉える新しい培養装置の開発も進んでいる。

第１世代HaloTagマウスを応用した、成長過程の解析と線維症のin vivo解析（R3年度）として、すでに樹立がかなり進行している第１世代HaloTagマウスは、好きなタイミングで好きな色のHaloTag ligandを投与し共有結合により不可逆的にコラーゲンを染色できる。ホモマウスはプローブ化V型コラーゲンのみを発現するため、その性質を解析した。ヘテロマウスの交配による出産数が完全にメンデルの法則に従うことから、HaloTagマウスは問題なく生存できることが示唆された。またホモマウス同士の交配も問題なく出産し、成長期の体重が野生型と全く同等であり、コラーゲン異常によく見られる表現型が全く観察されなかった。以上のことから、我々の技術でコラーゲン線維の機能が完全に維持できていることを証明した。次に、イメージングを実施するために、生きたマウスへのHaloTag ligand投与と、摘出した臓器の染色法の２つの方法を検討し、いずれも適切な条件を設定し、イメージングを実施可能となった。胎仔をライトシート顕微鏡で３次元撮影することにより、成長期のコラーゲン産生の全体像を明らかにすることができた。また成体において、一般にコラーゲンが多いと考えられている組織で蛍光輝度が高かった。また肝炎誘導マウスにおいて、肝臓で高輝度の蛍光が検出された。以上のことより、我々の技術でコラーゲン線維の機能が完全に維持できていることを証明することができた。また、テーマ４のin vitroでの解析に関して、コラーゲンの構造的特徴を偏光を用いて光学的に非常に簡便に解析できる新しい手法の開発に成功した。さらに、リアルタイムに継続して動画として捉える新しい培養装置の開発も進んでいる。