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デグラトンプローブを用いたG蛋白質相互作用因子の解析

デグラトンプローブを用いたG蛋白質相互作用因子の解析
使用 degraton 探针分析 G 蛋白相互作用因素
批准号：
18057003
负责人：
三輪 佳宏
金额：
$3.58万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
2006 至 2007
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18057003/
关键词：
蛍光タンパク質タンパク質分解イメージング遺伝子発現

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项目成果

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本研究では、タンパク質間相互作用の検出法の開発、およびそれを応用したGPCRの機能解析のための細胞内レベルコントロール方法として、Tetデグラトン技術を総合的に確立することを目指した。前年度に引き続き、GPCR同士の分子集合を極めて効率良く高感度に検出する目的にデグラトンプローブを応用することを実施した。当初、ロイコトリエン受容体であるBLT1は初めからオリゴメリゼーションしているのに対して、BLT2はほとんど分子集合していないと予想していたが、さらに詳細な細胞内局在を解析してみると、話はそれほど単純ではなく、受容体タンパク質の不安定化も、蛍光強度の違いに影響していることを見いだした。また、GPCRの活性化の指標となるβ-arrestinとの相互作用は検出が難しかったが、β-arrestin自体のオリゴメリぜーションはある程度検出できる方法を構築することが必要である。最後に、BRET法を用いた相互作用検出を改良し、相互作用の履歴をメモリーできるようにする実験手法を試みた。蛍光タンパク質の種類を変更することで、前年度に比べて高感度化することに成功したが、長時間の観察は困難であり、添加する試薬の種類や観察の光学系について何らかの工夫が必要であることが明らかとなった。これとは別にGPCRの活性化を細胞骨格のダイナミックな変化を指標にイメージングによって解析するあらたな手法を確立した。
期刊论文(4)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
ユビキチン様タンパク質のイメージングによる解析
泛素样蛋白的成像分析
DOI： --
发表时间： 2007
期刊：
影响因子： --
作者： [Akinobu Maeda, 早坂勇樹]
通讯作者： 早坂勇樹
蛍光・発光試薬の選び方と使い方
如何选择和使用荧光/发光试剂
DOI： --
发表时间： 2007
期刊：
影响因子： --
作者： [Akinobu Maeda, 早坂勇樹, 三輪佳宏(編集)]
通讯作者： 三輪佳宏(編集)
蛍光性タンパク質を別の蛍光波長を発することができる構造又は蛍光を発することが可能な構造に変化させる方法、蛍光性タンパク質を用いる方法、及びタンパク質複合体
将荧光蛋白转变为能够发射不同荧光波长的结构或能够发射荧光的结构的方法、使用荧光蛋白的方法以及蛋白质复合物
DOI： --
发表时间： 2006
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Inactivation of AR activates HGF/c-Met system in human prostatic carcinoma cells
DOI： 10.1016/j.bbrc.2006.07.040
发表时间： 2006-09-08
期刊： BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS
影响因子： 3.1
作者： [Maeda, Akinobu, Nakashiro, Koh-ichi, Oyasu, Ryoichi]
通讯作者： Oyasu, Ryoichi
Establishment of model animals for analyzing collagen in three-dimensional construction, tissue maintenance and fibrosis
新規細胞質品質管理システムの分子機構の解明
  • 批准号：
    20059006
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 资助金额：
    $3.71万
  • 财政年份：
    2008
  • 负责人：
    三輪 佳宏
  • 依托单位：
    University of Tsukuba
生体内DNA組み替えの光制御技術の開発
  • 批准号：
    20650061
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
  • 资助金额：
    $2.11万
  • 财政年份：
    2008
  • 负责人：
    三輪 佳宏
  • 依托单位：
    University of Tsukuba
マウス個体イメージングによる薬物動態の数理モデル解析
  • 批准号：
    20016001
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 资助金额：
    $5.12万
  • 财政年份：
    2008
  • 负责人：
    三輪 佳宏
  • 依托单位：
    University of Tsukuba
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