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生体内DNA組み替えの光制御技術の開発

体内DNA重组光控技术的开发

基本信息

批准号：
20650061
负责人：
三輪佳宏
金额：
$ 2.11万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

テーマ)厳密制御Tet-Cre発現システムの構築複数のテーマを同時進行で進めた中で、本年度はこのテーマにおいて最も大きな成果を得ることができた。我々はすでにジフテリア毒素遺伝子において、2重制御系の有効性を確認している。転写制御のみや分解制御のみでは、dox非添加時においても毒素の発現がもれてしまっているため細胞は死滅するが、2重制御の場合にのみ、dox非添加時に細胞が生き残り、厳密な発現調節が実現できていることがわかる。そこで本研究ではこれをCreの発現調節に応用し、厳密な制御と高感度な発現誘導を試みた。昨年までに、二重制御でかつ、発現誘導時にも毒性を防ぐことができる新しい発現系の構築には成功したが、逆に誘導時に高発現を実現できるベクターは未完成である。光誘導によるdoxは低濃度になることが予想されるため、高感度発現系も必要である。そこで本年度にはこの発現系の構築を試みた。分解制御系に用いるタンパク質と転写調節に用いるタンパク質が相互作用していることによって、昨年度までのようなブレーキ機能が働いているため、これを排除し別々に働くようにすることによって、高感度誘導発現系を構築することを試みた。その結果、転写のみ、タンパク質分解のみ、ではそれぞれ10倍程度の誘導率しか得られないのに対して、新たに開発したシステムでは数十倍の誘導発現を実現できることが明らかとなった。これによりCreによる組換えを高感度に制御することが可能となった。

Tet-Cre is the best way to build a company. We have to confirm the presence of the toxin in the system. When dox is not added, the toxin is produced in the cell. When dox is not added, the toxin is produced in the cell. When dox is not added, the toxin is produced in the cell. When dox is not added, the toxin is produced in the cell. In this study, we tried to control the high sensitivity of Cre's expression by regulating its expression. In the past year, the construction of a new development system has been successfully completed, and the high level of development has not been completed. Light induced dox low concentration, high sensitivity This year, the construction of the development system was tried. Dissociation control system uses medium and medium to regulate medium and medium to regulate medium to regulate medium to As a result, the induction rate of the compound was increased by 10 times, and the induction rate of the compound was increased by 10 times. This is the first time I've ever seen a woman.