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時間軸に沿った核での物質動態可視化システムの開発

开发沿时间轴可视化原子核内物质动力学的系统

基本信息

批准号：
19038004
负责人：
三輪佳宏
金额：
$ 4.8万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

1) デグラトンプローブによる可視化SUMO標的タンパク質の同定19年度にひきつづき得られた候補タンパク質の検証を進めた。確認できたタンパク質については、核での局在とSUMO化の状態を、再びイメージングに戻って解析した。更にターンオーバーの状態についても解析を進めた。蛍光タンパク質Kaedeは、光照射によって波長が変化する際にβ脱離反応によりポリペプチド鎖が切断されるため、分子量の違いから光照射の時点で既に存在していたタンパク質とそれ以後に産生されたものを区別でき、パルスチェイス実験が可能である。これを応用することでターンオーバー速度が解析できる。以上の結果から、時間軸に沿ったイメージングの精度について総合的に検証する。新規SUMO化タンパク質が得られる可能性も高いので、その生理的な意義についての解析も実施した。さらに、SUMOの活性化状態そのものを直接的に検出できる実験系の構築を目指して、蛍光寿命測定技術を応用することを試みた。これまでタンパク質同士の結合をFRETで検出する場合には、2色の蛍光強度比によって解析していたため、分子間FRETの検出が困難であった。この問題を蛍光寿命測定装置の導入によって解決することを試みた結果、SUMOの活性化状態をFRETによって、極めて高速に検出することが可能となった。また昨年度より開発を進めていたKaedeのin vivo応用も並行して進め、細胞の動きをトレースできるモデル動物の創出に成功し、免疫系の解析に実際に応用した。

1)The quality of the visual SUMO target is scheduled to be confirmed in 2019, and the verification of the candidate quality of the SUMO target is being advanced. Confirm that the quality of the product is in the state of SUMO, and the quality of the product is analyzed. More information on the status of the file When the wavelength of light is changed, the β-depolarization is changed, and the molecular weight is changed. When the light is irradiated, the β-depolarization is changed, and the molecular weight is changed, the β-depolarization is changed. This is the first time I've ever seen a woman. The above results show that the Timeline is accurate and integrated. The new SUMO definition is based on high probability and physiological significance. In addition, SUMO activation state can be directly detected, and the system can be used for optical lifetime measurement. In this case, it is difficult to detect the FRET between molecules by analyzing the intensity ratio of two colors. This problem is caused by the introduction of optical lifetime measurement devices, test results, activation state of SUMO, and high speed output. In the past year, the development of Kaede in vivo has been successfully carried out, and the analysis of immune system has been carried out.