生細胞内分子間相互作用の定量的解析技術の開発

开发活细胞内分子相互作用的定量分析技术

• 批准号: 18016002
• 负责人: 三輪 佳宏
• 金额: $ 4.61万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18016002/
• 关键词: 蛍光タンパク質; タンパク質分解; イメージング; 遺伝子発現

分子間相互作用によって制御される分解調節にどのような細胞内因子が関わっているかを明らかにすることは、蛍光プローブの定量性を検討する上で非常に重要である。そこで本年度はこの分解調節機構を同定することを目的とした解析に最も力を注いだ。昨年度までに同定した、分解制御性プローブに共通して結合している細胞内タンパク質をRNAi法により順番にノックダウンして、蛍光プローブの強度変化を解析した。もしも分解制御を担う因子であった場合には、そのノックダウンによりDsRedの分解が抑制されることにより、蛍光強度の増強が起こると予想される。そこで、DsRedの蛍光強度を指標に、ノックダウンによって蛍光増強を起こす因子を探索した。その際、やはり昨年度において予想したとおりいくつもの因子が細胞の生存に必須であったため、誘導発現系を用いて時間経過を追跡する方法を用いた。その結果、いくつかの「分解制御候補因子」を同定することに成功した。本研究においては、単なる分解御系の同定だけではなく、そのシステムが定量的な測定に与える影響を明らかにすることが本来の目的であるため、まずは同じ蛍光タンパク質のDsRedとKaedeが同じように分解制御を受けているのかどうかに関して、解析を進めた.その結果、分解制御因子と予想されているタンパク質をノックダウンした場合に、DsRedでは著しい蛍光増強が見られたのに対して、Kaedeではむし逆に蛍光が減弱することが明らかとなった.このことは変性タンパク質を判定し分解系に引き渡す細胞内制御システムはあまり単純なものではなく、蛍光タンパク質同士であっても別経路によって制御されている可能性を示したものである.

Intermolecular interactions に よ っ て suppression さ れ る decomposition adjust に ど の よ う な cell factor が masato わ っ て い る か を Ming ら か に す る こ と は 蛍 light プ ロ ー ブ の quantitative を beg す 検 る で very important で に あ る. そ こ で this year は こ の adjusting mechanism for the decomposition を with fixed す る こ と を purpose と し た parsing に も force most を note い だ. Yesterday's annual ま で に with fixed し た, decomposition system royal プ ロ ー ブ に common し て combining し て い る intracellular タ ン パ ク qualitative を RNAi method に よ り shun's に ノ ッ ク ダ ウ ン し て 蛍 light プ ロ ー ブ の intensity variations change を parsing し た. も し も factoring system royal を bear う で あ っ た occasions に は, そ の ノ ッ ク ダ ウ ン に よ り DsRed の decomposition が inhibit さ れ る こ と に よ り, 蛍 light intensity の raised strong が こ る と to think さ れ る. そ こ で and DsRed の 蛍 light intensity を index に, ノ ッ ク ダ ウ ン に よ っ て 蛍 raised strong を light up こ す factor を explore し た. そ の interstate, や は り yesterday annual に お い て to think し た と お り い く つ も の に の survival factor が cells must be で あ っ た た め, inducing 発 now を with い て time 経 を tracing す を る method with い た. The そ そ result, the そ く く く く く く く く を を of the <s:1> "decomposition of the control candidate factor" を is determined to be する する とに とに and the た is successful. This study に お い て は, 単 な royal is の る decomposition with fixed だ け で は な く, そ の シ ス テ ム が quantitative determination of な に and え る influence を Ming ら か に す る こ と が had の で あ る た め, ま ず は with じ 蛍 light タ ン パ ク qualitative の DsRed と Kaede が じ with よ う に decomposition suppression を by け て い る の か ど う か に masato し て, parse を into め た. そ の results, decomposition と suppression factor to think さ れ て い る タ ン パ ク qualitative を ノ ッ ク ダ ウ ン し た occasions に and DsRed で は the し い 蛍 light raised strong が see ら れ た の に し seaborne て, Kaede で は む し inverse に 蛍 light weakened が す る こ と が Ming ら か と な っ た. こ の こ と は - sex タ ン パ ク qualitative を determine し decomposition is に lead き す cells Integrity royal シ ス テ ム は あ ま り 単 pure な も の で は な く 蛍 light タ ン パ ク mass with "で あ っ て も don't 経 road に よ っ て suppression さ れ て い を る possibility in し た も の で あ る.

项目成果

The C. elegans CBFβ homologue BRO-1 interacts with the Bunx factor, RNT-1, to promote stem cell proliferation and self-renewal

线虫 CBFβ 同源物 BRO-1 与 Bunx 因子 RNT-1 相互作用，促进干细胞增殖和自我更新

• 发表时间: 2007
• 期刊: Development 134
• 作者: Masaki T;Wakita T;Kato T.他;Kagoshima H
• 通讯作者: Kagoshima H

蛍光試薬の選び方と使い方

如何选择和使用荧光试剂

• 发表时间: 2007
• 作者: Masaki T;Wakita T;Kato T.他;Kagoshima H;Shigematsu Y;Uchida D;Ryusuke Yoshimi;田中順子;三輪佳宏;三輪佳宏(編集)
• 通讯作者: 三輪佳宏(編集)

テトラサイクリン系抗生物質によるタンパク質分解制御法

使用四环素抗生素控制蛋白质降解的方法

• 发表时间: 2005

蛍光資料の蛍光の局在態様を調べる方法

研究荧光材料中荧光定位的方法

• 发表时间: 2009

Novel embryonic stem cells expressing tdKaede protein photoconvertible from green to ted fluorescence.

表达 tdKaede 蛋白的新型胚胎干细胞可从绿色荧光转换为 ted 荧光。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Int. J. Mol. Med 20
• 作者: Masaki T;Wakita T;Kato T.他;Kagoshima H;Shigematsu Y
• 通讯作者: Shigematsu Y