权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

デグロン制御技術を応用した細胞内シグナル伝達解析システムの開発

应用降解决定子控制技术开发细胞内信号转导分析系统

基本信息

批准号：
17657062
负责人：
三輪佳宏
金额：
$ 2.24万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17657062/
关键词：
蛍光タンパク質タンパク質分解イメージング遺伝子発現

项目摘要

本研究では、タンパク質機能解析のための細胞内レベルコントロール方法として、Tetデグラトン技術を総合的に確立することを目指した。18年度より解析を進めているMAPキナーゼの他に、遺伝子そのものの組み替えによる機能発現調節系を薬剤依存的に自在にコントロールできる系を構築することを目的として、リコンビナーゼCreにも応用を進めた。ドキシサイクリンの添加の有無によって分解が制御され、細胞内レベルが変動するCre融合タンパク質を構築することができた。これと並行して、loxPでの組換えによって異なる波長特性の蛍光タンパク質が発現するレポーターベクターを構築し、同時に細胞に導入して解析したところ、ドキシサイクリン依存的に組換えを誘導することができた。しかし、非誘導時にもある程度の組換え細胞がみられ、制御の厳密性において不十分な結果であった。そこで、より厳密なコントロールを実現するために、転写・分解二重制御系の開発に取り組んだ。その結果、非誘導時の組換えを10分の1以下に減少させることに成功した。これはもちろん転写のみで制御した場合と比較してもはるかに高い精度でコントロールできていた。さらに、ドキシサイクリンの添加後に、どのくらいの時間で組換えが完了できるか、について詳細な時間経過を解析したところ、数日以上の時間を必要とすることが明らかとなった。そこで、今後はより短時間の発現誘導によって、組換えを確実に完了させることができるような改良が必要であることが明らかとなった。

This study aims to establish the integration of intracellular cellular cellular methods and Tet instrumentation technology for the functional analysis of proteins. In 2018, the analysis of MAP was carried out, and the functional development regulation system was established. The presence or absence of an additive in a protein is controlled by the presence or absence of an intracellular inhibitor. The wavelength characteristics of the light source are different from those of the light source, and the light source is different from the light source. In addition, the degree of organization and transformation of cells in non-induction time is not very high. The development of dual control system is composed of two parts: one part is composed of two parts; the other part is composed of two parts: one part is composed of two parts. The result of the experiment was that the induction time was less than 10 minutes, and the induction time was less than 1 minute. This is the first time I've ever been in a position where I've been After adding the file, the time of the file is changed, and the time of the file is analyzed in detail. The time of more than a few days is necessary. Therefore, in the future, there will be a short period of discovery and induction, and the replacement will be completed in a timely manner. Therefore, improvement will be necessary.