基本転写因子TFIIDに支配される標的遺伝子群の網羅的単離とそのプロモーター特性

全面分离基本转录因子TFIID控制的靶基因及其启动子特征

• 批准号: 15013247
• 负责人: 古久保 哲朗
• 金额: $ 3.33万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15013247/
• 关键词: 転写調節機構; 転写因子; 基本転写因子; 転写制御; 出芽酵母; マイクロアレイ; TFIID; TAF

コアプロモーター構造を認識する基本転写因子TFIIDは、転写調節因子から受け取った信号を転写量の増減へと変換する上で中心的な役割を果たす。我々はTAF1のTBP機能阻害領域TANDがTFIIDによる転写活性化の分子スイッチとして機能する可能性を示すとともに、コアプロモーターの認識能に異常をきたすtaf1点変異体を複数単離し(N568Δ,T657K)、その解析を進めてきた。TFIIDを含む普遍的転写因子間の機能的ネットワークの実体を明らかにしていくためには、それぞれの標的遺伝子を網羅的に単離するというゲノム生物学的手法が極めて有効である。今年度は、昨年度までにDNAチップ法を用いて同定したTANDの標的遺伝子の一つであるHIS4について、制限温度下における転写量減少の分子機構について詳しい解析を行った。その結果、TAND欠失により(1)転写調節因子BAS1からRNAポリメラーゼIIへの転写活性化シグナルの伝達効率が著しく低下すること、及び(2)BAS1の有する二種類の転写活性化ドメイン(AD)のうち、C端側に存在するADからのシグナルが特異的に阻害されることが明らかとなった。またDNAチップ法により同定した数百個の標的遺伝子のプロモーター解析を効率よく行うため、ポリリン酸の蓄積量を指標に遺伝子発現量を非破壊的にモニタリングする新規ハイスループット型プロモーターマッピング法について検討を行った。その結果、転写オフのキネティックスをレスポンス良く測定できるレポーター遺伝子の開発と、この系を組み込んだ酵母を^<31>P-NMR測定用トレイに自動的に整列させるためのコロニースポッターの開発に成功した。

The basic writing factor TFIID, the writing adjustment factor, the writing quantity, the transformation, the upper center and the lower center are recognized. TBP functional barrier domain of TAF1: TAND, TFIID, TBP, TBP TFIID contains a wide range of functional factors, including biological methods, such as the identification of biological factors, the identification of biological factors, and the identification of biological factors. This year, the DNA chip method was used to determine the DNA sequence of the target gene. The molecular mechanism of the target gene was analyzed in detail at the temperature limit. As a result, TAND deficiency is characterized by: (1) the presence of BAS1, a transcription regulator, and (2) the presence of BAS1, two types of transcription activation (AD), and C-terminal AD, and specific inhibition. The DNA chip method is used to analyze the protein expression of hundreds of target genes, and the new method is used to analyze the protein expression of hundreds of target genes. The <31>results show that the development of P-NMR is successful.

项目成果

Kobayashi, T.Kokubo, Y.Ota, S.Yokoyama: "Promoter-specific function of the TATA element in undifferentiated P19 cells."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 310・2. 458-463 (2003)

小林、T.Kokubo、Y.Ota、S.Yokoyama：“未分化 P19 细胞中 TATA 元件的启动子特异性功能”。Biochem.Biophys.Res.Commun. 310・2（2003）。

A.Kobayashi, T.Miyake, M.Kawaichi, T.Kokubo: "Mutations in the histone fold domain of the TAF12 gene show synthetic lethality with the TAF1 gene lacking the TAF N-terminal domain (TAND) by different mechanisms from those in the SPT15 gene encoding the TAT

A.Kobayashi、T.Miyake、M.Kawaichi、T.Kokubo：“TAF12 基因的组蛋白折叠结构域中的突变通过与缺乏 TAF N 末端结构域 (TAND) 的 TAF1 基因表现出合成致死性，其机制与

S.Takahata, H.Ryu, K.Ohtsuki, K.Kasahara, M.Kawaichi, T.Kokubo: "Identification of a novel TATA element-binding protein binding region at the N terminus of the Saccharomyces cerevisiae TAF1 protein."Journal of Biological Chemistry. 278・46. 45888-45902 (20

S.Takahata、H.Ryu、K.Ohtsuki、K.Kasahara、M.Kawaichi、T.Kokubo：“鉴定酿酒酵母 TAF1 蛋白 N 末端的新型 TATA 元件结合蛋白结合区域。”生物化学278・46.

S.Takahata, K.Kasahara, M.Kawaichi, T.Kokubo: "Autonomous function of the amino-terminal inhibitory domain of TAF1 in transcriptional regulation."Molecular and Cellular Biology. 24・8(in press). (2004)

S.Takahata、K.Kasahara、M.Kawaichi、T.Kokubo：“TAF1 氨基末端抑制域在转录调控中的自主功能”。《分子与细胞生物学》24·8（出版中）。

H.Ohdate, C.R.Lim, T.Kokubo, K-i.Matsubara, Y.Kimata, K.Kohno: "Impairment of the DNA-binding activity of the TATA-binding protein (TBP) renders the transcriptional function of Rvb2p/Tih2p, the yeast RuvB-like protein, essential for cell growth"Journal of

H.Ohdate、C.R.Lim、T.Kokubo、K-i.Matsubara、Y.Kimata、K.Kohno：“TATA 结合蛋白 (TBP) 的 DNA 结合活性受损会导致 Rvb2p/Tih2p 的转录功能丧失，Rvb2p/Tih2p 是