抑制性シナプス後部の分子構成解明と特定の抑制性シナプス操作技術の開発

阐明抑制性突触后的分子组成并开发特定的抑制性突触操纵技术

• 批准号: 21K06377
• 负责人: 山崎 世和
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K06377/
• 关键词: 抑制性シナプス; アデノ随伴ウイルス; シナプス伝達; シナプス分子構成

脳には様々な種類の抑制性神経細胞が存在するが、それぞれのシナプスに集積する分子の構成は明らかになっていない。本研究では、様々な分類が存在する抑制性シナプスのシナプス後部において、「どの抑制性シナプスにどの分子が局在しているのか？」という学術的問いを明らかにし、さらにそれらの分子を人為的に操作することによって、特定の抑制性シナプスを得意的に操作する技術を開発することを目的としている。三年間の研究期間の二年目である本年度は、初年度で検討したAAVを用いた遺伝子導入方を活用し、脳内への目的遺伝子の発現系確立に焦点を当てて研究を遂行した。本研究では、大脳皮質錐体細胞における抑制性シナプス後部分子を精製・同定するため、近接依存性ビオチン化標識酵素TurboIDにALFAタグ・膜貫通ドメインを導入したタンパク質(labeling module)を錐体細胞へ、さらにこのタンパク質を特定の抑制性シナプスへ局在させるためのGPIアンカーを融合した抗ALFAナノボディ（targeting module）を抑制性神経細胞へ、発現させる。初めに、抑制性シナプス全般をラベルできるか検討するために、SynプロモーターとmiRNAの標的配列を組み合わせた抑制性神経細胞特異的AAVベクターにlabeling moduleを組み込んだ。また、labeling moduleはCaMKIIプロモーターの下流に組み込んだ。これらのAAVを血液脳関門透過型のCapsidで作成し、大脳皮質に直接AAVを打ち込みWestern blottingと免疫染色をしたところ、Targeting module、Labeling moduleのどちらも、発現していることが確認された。

In many cases of inhibitive mythology, there is a significant increase in the number of molecules involved in the inhibition process. In this study, there are some information in this study. In this study, there are inhibitive agents, inhibitive agents and molecular agents in the back of the study. "there are questions about the science of science and technology, the operation of human beings, the operation of specific inhibitive systems, the proud operation of the equipment, the operation of the equipment, the purpose of the operation, the purpose of the operation, and so on. During the three-year study period, during the two-year study period, the current year and the beginning of the year will be sure to establish the focus of the current and the beginning of the year during the current year and the beginning of the year, and to ensure the focus of the study when the current and early years of the study will be carried out. In this study, TurboID, Macrodermis, somatic cells, inhibitory cells, posterior molecules, homologous molecules, proximity-dependent enzymes, enzymes, ALFA, and membrane were detected in this study. This is the first time that the specific inhibitory activity has been detected in the anti-ALFA inhibition mechanism (targeting module), which is known to be known as GPI fusion. The configuration of primary, inhibitive agents, general antitumor agents, and Syn antigens, miRNA antigens, is integrated with the AAV inhibitive god cell specific AAV antigens labeling module system. Please, labeling module